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CHINESE MEDICAL JOURNAL《中华医学杂志》(英文版) 月刊 ISSN:0366-6999 影响因子393 CELL RESEARCH《细胞研究》(英文版) 双月刊 1001-0602 729中西医结合杂志(英文版)中医杂志(英文版)中国药理学杂志
临床医学进展，不过是核心不是SCI
多年来，大部分分子诊断实验室的核心技术都主要集中在检测特异性、相对较短的DNA或RNA片段上。该技术能诊断传染性疾病、鉴别影响药物代谢的特殊基因变异型或检测与疾病有关的基因，如与癌症有关的基因。这些检测的核心是实时定量聚合酶链反应（PCR）、转录调节扩增（TMA）、靶向扩增和信号扩增等类似技术的应用。桑格排序和DNA片段分析或采用毛细电泳法的凝胶法都是分子诊断实验室的关键技术，但他们通常还包括检测过程中的扩增步骤。为了能顺利应用那些采用DNA和RNA来诊断疾病的检测，分子诊断实验室必须要使用定义明确的工作流程，从而得到稳定的、有效的结果，而当前已存在能帮助诊断实验室实现每个工作流程流水化的特殊工具。检测的基本流程如下所示：1、样本收集和制备。 从样本中提取出用于检测的基因。2、扩增：一旦分离出基因物质，必须立即将其扩增到可检测数量，以便做出诊断命令。3、检测：获得足够的目标物质后，光型传感器将读取与即将检测的目标物质相对应的信号。信号必须是单一的或多样的，从而实现在一次反应（如多通道检测）中检测到多种目标物质。4、数据分析：对在检测步骤中读取出的信号进行分析。将分析结果转换为实验室人员随时可以解释的信息，从而最终为临床医生提供诊断结果。
长期以来，疾病的诊断主要依据病史、症状、体征和各种辅助检查，如血液学、病理学、免疫学、微生物学、寄生虫学乃至物理学检查等。然而，上述检查方法都具有其各自的局限性，使得许多疾病未能被及时准确地诊断，从而延误了治疗良机。因为许多外科疾病在病人出现症状、体征及生化改变之前就已存在相当一段时间，所以人们一直在盼望能找到一种技术，在疾病一旦发生，甚至尚未出现症状、体征及生化改变之前，就能作出诊断；对于某些可能的致病因素，包括食品、水质、环境中存在的病原体，人们也期望能有简单准确的方法及时进行检测。分子生物学技术的发展使人们渴望已久的上述愿望得以实现，这种在分子生物学理论和技术发展基础上建立起来的一门全新的诊断技术就是分子诊断。 生物大分子主要指核酸(DNA和RNA)和蛋白质，通过从分子水平上完成DNA, RNA或蛋白质检测，从而对疾病作出诊断的方法称为分子诊断，目前常用的方法有基因诊断和肿瘤标志物检测两种。 (一)基因诊断 基因诊断是用分子生物学的理论和技术，通过直接探查基因的存在状态或缺陷，从基因结构、定位、复制、转录或翻译水平分析基因的功能，从而对人体状态与疾病作出诊断的方法。基因诊断检测的目标分子是DNA或RNA，反映基因的结构和功能。检测的基因有内源性(即机体自身的基因)和外源性(如病毒、细菌等)两种，前者用于诊断基因有无病变，后者用于诊断有无病原体感染。 基因诊断的意义在于不仅能对某些疾病作出确切诊断，如确定某些遗传病，也能确定基因与疾病有关联的状态，如对疾病的易感性、发病类型和阶段的确定等。就目前已经开展的工作而言，外科领域的遗传性疾病、遗传易感性疾病、多种恶性肿瘤、感染性疾病、器官移植反应等都可以用基因诊断的方法加以诊断。 基因诊断的主要技术有核酸分子杂交、聚合酶链反应和生物芯片技术。 核酸分子杂交技术 (1)原理：具有一定互补序列和核昔酸单链在液相或固相中按碱基互补配对原则缔合成异质双链的过程，称为核酸分子杂交。杂交的双方是待测核酸序列和探针序列。应用该技术可对特定DNA或RNA序列进行定性或定量检测。 (2)基因探针及其标记：基因探针是一段与待测DNA或RNA互补的核昔酸序列，可以是DNA或RNA，长度不一，可为完整基因，也可为其中一部分。根据探针的来源和性质分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针和人工合成的寡核昔酸探针。作为探针至少必须满足两个条件，一是应为单链(或通过变性形成单链)，二是应带有可被示踪和检测的标记。有了合适的探针，就有可能检测出目的基因，观察有无突变，也可根据探针的结合量进行定量检测。选择探针最基本的原则是要有高度特异性，其次也需考虑到制备探针的难易性和检测手段的灵敏性等其他因素。 (3)常用核酸分子杂交技术：①Southern印迹杂交；②Northern印迹杂交；③斑点杂交( dotblotting)；④原位杂交(in situ hybridization)；⑤夹心杂交(三明治杂交)；⑥液相杂交。 聚合酶链反应(即lymerase chain reaction，PCR) (1)原理：PCR是模板DNA,引物和四种脱氧核糖核昔三磷酸(dNTP )在DNA聚合酶作用下发生酶促聚合反应，扩增出所需目的DNA。包括三个基本步骤：双链DNA模板加热变性成单链(变性)；在低温下引物与单链DNA互补配对(退火)；在适宜温度下TapDNA聚合酶催化引物沿着模板DNA延伸。 (2) PCR引物：PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性，引物设计决定PCR反应的成败。由于致病基因是在正常基因序列中发生点突变、片段插人和(或)缺失，基因两翼的DNA序列和正常基因仍然相同，因此根据基因两翼的DNA序列可设计出各20个碱基左右的一对引物。 (3)常用PCR技术：利用PCR技术，在适当条件下扩增目的基因，然后分析PCR产物，便可判断其是否为致病基因及其变异性质。PCR技术具有快速、灵敏、特异性高等特点，为扩大其应用范围，根据需要目前已衍行和发展出以下方法：①常规PCR；②复合PCR；③反转录PCR (RT-PCR)；④原位PCR；⑤反向PCR；⑥膜结合PCR；⑦彩色PCR；⑧定量PCR；⑨固着PCR；⑩免疫PCR。 生物芯片技术是近年发展起来的分子生物学与微电子技术相结合的核酸分析检测技术。最初的生物芯片技术主要目标是用于DNA序列测定、基因表达谱鉴定和基因突变体检测和分析，所以又称为DNA芯片或基因芯片技术。由于目前这一技术已扩展至免疫反应、受体结合等非核酸领域，出现了蛋白质芯片、免疫芯片、细胞芯片、组织芯片等，所以改称生物芯片技术更符合发展趋势。 1)N八芯片技术的基本原理是将cDNA或寡核昔酸探针以105 ~ 106位点／c耐的密度结合在固相支持物(即芯片)上，每个位点上的cDNA或寡核昔酸探针的顺序是已知的，将该探针与荧光标记的待测样品DNA,RNA或cDNA在芯片上进行杂交，然后用激光共聚焦显微镜对芯片进行扫描，并配合计算机系统对杂交信号作出比较和检测，从而迅速得出所需的信息。由于它携带信息量大、体积小、分析过程自动化、分析过程快及所需样品和试剂量少，因而具有广泛的应用前景、迄今能在临床L用于疾病诊断的芯片主要见于传染性疾病，如丙型肝炎、乙型肝炎及艾滋病等少数几种疾病病毒检测芯片。如果将该技术广泛用于疾病诊断，目前仍存在较大困难。原因在于当前对基因功能的认识仍不充分，而且疾病的发生与很多因素有关，要从大量基因库中筛选出疾病相关的特异性基因制成芯片，难度相当大。 (二)肿瘤标志物检测肿瘤标志物是指肿瘤细胞和组织由于相关基因或异常结构的相关基因的表达所产生的蛋白质和生物活性物质，在正常组织中不产生或产量甚微，而在肿瘤病人组织、体液和排泄物中可检测到。此外，在病人机体中，由于肿瘤组织浸润正常组织，引起机体免疫功能和代谢异常，产生一些生物活性物质和因子，虽然这些物质和因子特异性低，但与肿瘤发生和发展有关，也可用于肿瘤辅助诊断。 肿瘤标志物的测定方法 (1)生物化学技术：用于测定由肿瘤细胞产生并分泌到体液中的肿瘤标志物，因其含量与肿瘤活动度有关，所以适用于绝大多数肿瘤病人的监测、疗效和预后观察。 (2)免疫组化技术：可从形态学上详细了解细胞分化、增殖和功能变化的情况，有助于确定肿瘤组织类型、预后和临床特征的分析。 (3)单克隆抗体技术：临床上已用于甲胎蛋白(AFP )、癌胚抗原(CEA),前列腺特异性抗原 肿瘤标志物分类 (l)原位性肿瘤相关物质：在同类正常细胞含量甚微，而当细胞癌变时迅速增加，如各种癌细胞内的酶气 (2)异位性肿瘤相关物质：是由恶变的肿瘤细胞产生，不是同类正常细胞的组分，如异位性激素、在肺癌时促肾上腺皮质激素(ACTH)明显升高。 (3)胎盘和胎儿性肿瘤相关物质：癌细胞的特点是无限增殖，并向周围组织侵袭和转移，甚至向远隔组织转移，而胎盘绒毛细胞和胎儿组织细胞也有这样的特点。当胎儿成长后，有一些物质就消失，如果成人组织细胞发生癌变，这类胎盘性或胚胎性物质就会产生或表达癌胚性物质，如AFP、CEA；癌胎盘性物质，如hCG(人绒毛膜促性腺激素)等。 (4)病毒性肿瘤相关物质：凡能在人或动物引起肿瘤或细胞恶性转化的病毒，均称为肿瘤病毒。与肿瘤有关的病毒有HTL-1病毒(成人T细胞白血病)、EB病毒(Burkitt淋巴肉瘤)、HS病毒(宫颈癌与皮肤癌)、HB病毒(肝癌)和人巨细胞病毒等。 (5)癌基因、抑癌基因及其产物：各种致癌因素诱发基因激活和抑癌基因失活及其表达产物异常，是肿瘤发生、发展的重要标志。 需要指出的是，同一肿瘤可含有多种肿瘤标志物，而不同肿瘤或同种肿瘤的不同组织类型除有共同的标志物外，也可有不同的特异性标志物，即某一肿瘤的标志物对另一肿瘤来说不一定是标志物，而某一组织的正常产物对另一组织来源的肿瘤却可成为较好的肿瘤标志物。 检测肿瘤标志物的临床意义在于：早期发现或诊断原发肿瘤；筛查肿瘤高危人群；鉴别肿瘤的良、恶性；判断肿瘤的发展过程；观察肿瘤的治疗效果；预测肿瘤的复发和预后。
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:张立国、石建党、冯剑利、李钟、张琚 Type IV collagenase (matrix metalloproteinase-2 and-9) in prostate PROSTATE CANCER AND PROSTATIC DISEASES 7-4-2005-1-1吴荃，周颖，陈林峰，石建党，王春雨，苗琳，Mocker, H; Park, I;李钟，张琚 Benign prostatic hyperplasia (BPH) epithelial cell line BPH-1 induces aromatase expression in prostatic stromal cells via prostaglandin E JOURNAL OF ENDOCRINOLOGY王春雨，石建党，闫春和，吴荃，Klocker, H; Park, I;李钟，张琚 Development of a cell-isolation method for human prostatic smooth muscle cells based on cell type-specific activation of the SM22 gene BJU INTERNATIONALZhang, J; Qi, HX; Wang, HJ; Hu, P; Ou, LL; Guo, SH; Li, J; Che, YZ;Yu,YT; Kong, DL Engineering of vascular grafts with genetically modified bone marrow mesenchymal stem cells on poly (propylene carbonate) ARTIFICIAL ORGANS张智松王亮梅玫朱彦杜小玲李钟Irwin Park张琚石建党 Both nongenomic and genomic effects are involved in estradiol’s enhancing the phenotype of smooth muscle cells in cultured prostate stromal The Prostate樊官伟高秀梅王宏朱彦张琚胡黎明Yan-Fang Su, Li-Yuan Kang,张伯礼 The anti-inflammatory activities of Tanshinone IIA, an active component of TCM, are mediated by Journal of Steroid Biochemistry & Molecular Biology周颖肖向茜陈林锋杨睿石建党杜小玲Helmut Klocker, Irwin Park李钟张琚 Proliferation and phenotypic changes of stromal cells in response to varying estrogen/androgen levels in castrated Asian Journal of AndrologyIrwin I Park, Qiang Zhang, Victoria Liu,张琚, Chung L Estrogen at low concentrations acts through distinct pathways in normal versus BPH-derived prostate stromal the Journal of Clinical Endocrinology张立国王春雨杨睿石建党符蓉陈林锋Helmut Klocker张琚 Real-time quantitative RT-PCR assay of prostate-specific antigen and prostate-specific membrane antigen in peripheral blood for detection of prostate cancer Urol Oncol张智松段磊杜小玲马洪顺Irwin Park李钟张琚石建党 The proliferative effect of estradiol on human prostate stromal cells is mediated through activation of ERK The Prostate吴荃石建党陈林锋王春雨Irwin Park李钟张琚 Regulation of proliferation and differentiation of prostatic stromal cells by estradiol through prostateic epithelial cells (BPH-1) in a paracrine The BJU International刘树业Yu XD, Song CJ, Lu W, Zhang JD, Shi XR, Duan Y张琚 Cloning and expression of special F protein from human World Journal of Gastroenterology牛远杰马腾骧张琚徐勇韩瑞发孙光 Androgen and prostatic ChinaAsian J AndrolZhou W, Park I, Pins M, Kozlowski JM, Jovanovic B,张琚,李钟, Ilio K Dual regulation of proliferation and growth arrest in prostatic stromal cells by transforming growth factor- Endocrinology张琚Klaus Jung, Michael Lein, Glen Kristiansen, Birgit Rudolph, Steffen Hauptmann, Dietmar Schnorr, Stefan A Loening, and Ralf L Differential expression of matrix metalloproteinases and their tissue inhibitors in human primary cultured prostatic cells and malignant prostate cell The Prostate牛远杰徐勇张琚BAIHYANG马腾骧 Proliferation and differentiation of prostatic stromal BJU InternationalSimone T Boesch, Stefan Corvin,张琚, Hermann Rogatsch, George Bartsch, and Helmut K Modulation of the Differentiation Status of Cultured Prostatic Smooth Muscle Cells by an a1-Adrenergic Receptor A The ProstateFibroblast Growth Factor Levels in Cancer Cell and in Sera of Patients suffering from Proliferative Disorders of the P The Prostate 31--223-1997-1-1张琚, Michael W Hess, Martin Thurnher, Alfred Hobisch, Christian Radmayr, Marcus V Cronauer, Anton Hittmair, Zoran Culig, Georg Bartsch and Helmut K Human prostatic smooth muscle Cell in culture: Estradiol enhances expression of smooth muscle cell-specific The prostateZoran culig, Alfred hobisch, Marcus V Cronauer, Christian Radmayr, Anton Hittmair,张琚, Martin Thurnher, Georg Bartsch and Helmut K Regulation of prostatic growth and function by peptide growth The prostateMathias ziegler, Dierk Jorcke,张琚, Rainer Schneider, Helmut Klocker, Bernhard Auer, Manfred S Characterization of Detergent-Solubilized Beef Liver Mitochodrial NAD?glycohydrolase and its Truncated Hydrosoluble F Biochemistry 35-16-5207-1996-4-23张琚, Mathias Ziegler, Rainer Schneider, Helmut Klocker, Bernhard Auer, Manfred S identification and purification of a bovine liver mitochondrial NAD? 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回答 郑稼 教授、主任医师、博士生导师。国家级知名专家，享受国务院特殊津贴专家；河南省人民医院骨科教研室主任；骨科行政主任；关节外科主任；河南省骨科规范化培训基地主任；河南省关节外科治疗中心主任；河南省数字骨科重点实验室主任；政协河南省第九届、第十届、第十一届常委；中华医师协会骨科分会常委；中华医师协会骨科分会关节外科工作委员会常委；中华医师协会骨科分会3D打印专家委员会委员；全国骨科住培专家委员会委员；中华医学会骨科分会关节外科学组委员；河南省医师协会骨科分会会长；河南省医师协会关节外科专家委员会主任；河南省医学会骨科分会关节外科学组组长；《矫形外科杂志》（JOA）中文版编委，《中华骨科杂志》编委，《中华骨与关节外科》杂志编委，《中华临床解剖学杂志》编委，《中国矫形外科杂志》常务编委，《骨科》杂志编委，《中华实用诊断与治疗杂志》编委，《中国实用医刊》编委。
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