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收稿日期：2007-10-25基金项目：深圳市科技和信息局基金资助项目作者简介：王丹（1982-），女，辽宁本溪人，硕士研究生，从事植物生物技术研究。注：雷江丽为通讯作者。大花美人蕉茎尖组织培养技术研究王 丹1,2，雷江丽2，吴燕民3，吕 慧2，郁继华1(甘肃农业大学 农学院，甘肃 兰州 730070；深圳市园林科学研究所，广东 深圳 518003；中国农业科学院 生物技术研究所，北京 100081)摘 要：以大花美人蕉（Canna×generalis）根茎茎尖为外植体进行组织培养技术研究，筛选出芽诱导适宜的培养基为MS + 6-BA 0mg/L（单位下同）+ TDZ 03；MS + 6-BA 0 + TDZ 03 + NAA 1 培养基能较好地诱导分化出丛生芽, 继代增殖培养中与MS + 6-BA 0 + TDZ 03 + NAA 1 培养基交替使用可减少畸形芽，增殖系数达67；适宜的生根培养基为MS + 6-BA 0 + NAA 5，生根率达67%，且植株生长健壮，移栽易成活。关键词：大花美人蕉；茎尖；组织培养中图分类号：Q1 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2008)01-0033-04Research on Shoot-tip Culture of Canna×generalisWANG Dan1,2, LEI Jiang-li2, WU Yan-min3, LÜ Hui2, YU Ji-hua1(College of Agronomy, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, Gansu China; Shenzhen Institute of LandscapeGardening, Shenzhen 518003, Guangdong China; Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of AgriculturalSciences, Beijing 100081, China)Abstract: The paper mainly studied on tissue culture of Canna×generalis with the stem tips The results showed that the bud inoculation medium was MS + 6-BA 0mg/L+ TDZ03mg/L; the best of clump shoot induction and differentiation medium was MS + 6-BA 0mg/L +TDZ 03mg/L + NAA 1mg/L; using MS + 6-BA 0mg/L + TDZ 03mg/L + NAA 1mg/L asproliferation medium, an optimal proliferation rate was When the two kinds of mediumused alternatively, the effect was The optimum rooting medium was MS + 6-BA 0mg/L +NAA 5mg/L, the rate of rooting could reach 67%, and cultured in this medium, the plant grewwell and easy to Key words: Canna×generalis; shoot-tip; tissue culture大花美人蕉(Canna×generalis)属美人蕉科(Cannaceae)美人蕉属(Canna)的园艺杂交种[1]，是多年生喜光宿根草本花卉，原产美洲热带和非洲等地。其枝叶茂盛、花朵艳丽、姿态优美、花期长，在深圳地区几乎全年开花，是配置大型花坛的优良品种。大花美人蕉不仅观赏价值高，而且能吸收硫、氯、氟、汞等有害物质，具有净化空气、保护环境的作用，因此，世界许多城市的园林绿化中都广泛应用。美人蕉传统的繁殖方式主要采用分切地下根茎的方法，繁殖速度慢、增殖效率低，而且连续营养繁殖造成病毒积累致使病毒病在各地相当普遍，严重影响其观赏价值。利用茎尖组织培养进行脱毒试管苗快繁，是目前大力繁殖与推广美人蕉的主要手段。关于美人蕉组织培养的研究报道较少[2,3]，本研究探索其组织培养高效的再生体系，以期为品种提纯复壮及遗传转化、性状改良奠定基础。2008,37(1):33-Subtropical Plant Science第·34· 37 卷1 材料与方法1 材料供试材料为目前城市绿化中普遍应用的大花美人蕉‘President’品种。2 外植体选择与处理选择生长健壮、无病虫害的优良母株，挖取带芽胞的根茎，去除表面老皮并用肥皂水清洗。用75%乙醇棉擦拭，然后采用不同的消毒剂及处理时间（1%升汞10min、2%次氯酸钠10min、2%次氯酸钠20min、2%次氯酸钠 + 1%升汞5min、2%次氯酸钠 + 1%升汞10min），封闭式振摇灭菌。无菌水冲洗5 次，置于超净工作台上备用。接种前，剥去外部叶片，露出生长点，立即切取茎尖进行接种。3 培养方法及培养条件试验于2006 年10 月在深圳市园林科学研究所组培室进行。诱导、增殖和生根培养基均选用MS为基本培养基，在不同培养阶段附加不同种类、不同浓度配比的植物生长调节剂（表2～表4），蔗糖3%，pH 8。培养温度(28±2)℃，光照强度2 500 lx，光照周期为14h/d，相对湿度70%～80%。每处理接种30 瓶。定期观察试管苗生长与分化情况。2 结果与分析1 不同消毒处理方式对外植体无菌化的影响因供试外植体取自美人蕉地下根茎，表面污染物较多，不易消毒，且不同植物及外植体的成熟度对消毒剂的反应不同，故本试验选用升汞和次氯酸钠进行灭菌效果比较，以筛选合适的消毒剂及消毒处理时间。由表1 可知，2%次氯酸钠20min 处理的无菌化效果较好，但茎尖褐化较严重，说明灭菌时间过长对去老皮后的幼嫩根茎影响较大。1%升汞10min 处理与2%次氯酸钠 + 1%升汞 10min处理，无菌化效果差异不大，但2%次氯酸钠 + 1%升汞 10min 处理有轻微药害。因此，后续实验选用1%升汞处理10min 进行外植体消毒。2 不同生长调节剂配比对芽诱导的影响以MS 为基本培养基，附加不同浓度6-BA、NAA、2,4-D、KT、TDZ 等（表2），以筛选出较适宜美人蕉茎尖诱导分化的配方。因美人蕉根茎具有休眠特性，芽诱导分化较难。TDZ 具有很强的促进细胞分裂活性，05～0μmol/L 即可有效促进分化[4]，因此，本实验对TDZ 的诱导效果进行初步探索。试验表明，在不添加任何生长调节剂的MS 基本培养基（1 号）上，茎尖接种10d 后开始生长，叶片展开后，生长停止；15d 后转接到新的MS 培养基上无明显生长，随后叶片逐渐变黄、萎蔫，说明基本培养基中添加生长调节剂是美人蕉离体培养的必要条件。在仅添加6-BA 的2、3、4 号培养基中，高浓度的2 号培养基分化率为33%，明显好于3、4号培养基，说明美人蕉启动芽诱导分化需要高浓度的细胞分裂素（表2）。11～16 号培养基添加物为不同生长调节剂与TDZ 组合（表2）。仅添加TDZ 的培养基分化率为0，而多种生长调节剂配合使用分化效果更好[5]。其中15 号培养基的侧芽分化率最高，达33%，且每个茎尖可增殖2～3 个侧芽，但个别茎尖经多次转接后有畸形芽；与2 号培养基相比，分化率明显提高，说明添加低浓度TDZ 可促进芽诱导分化（表2）（图版-a）。5、6、7 号培养基为生根培养基，探讨NAA 对美人蕉茎尖生长和生根的影响。试验结果初步说明美人蕉在6-BA/NAA 小于2/5 时生根率可达50%以上（表2）。8、9、10 号培养基，探讨美人蕉脱分化，诱导愈伤组织，但结果均不理想。因此，建立高效的美表1 不同消毒剂及处理时间对外植体无菌化的影响处 理 接种数污染数污染率(%) 药害情况1%升汞10min 30 5 67 基本无药害2%次氯酸钠10min 30 12 00 无药害2%次氯酸钠20min 30 4 33 20%有轻微药害2%次氯酸钠+1%升汞5min 30 10 33 3%有轻微药害2%次氯酸钠+1%升汞10min 30 5 67 7%有药害第1 期 王丹,等：大花美人蕉茎尖组织培养技术研究 ·35·人蕉遗传转化再生体系还需进一步探索愈伤组织诱导途径。3 芽继代增殖为了探讨优化的芽继代增殖培养基配方，按表3 设计6-BA、NAA、TDZ 的正交实验，以15 号培养基上分化出的丛生芽为接种材料，进行继代增殖培养（图版-b）。由表3 可见，除17、18 号培养基外，低浓度TDZ（03mg/L）的分化促进作用较高浓度（3mg/L）的效果好，说明高活性的TDZ 浓度过高反而抑制分化。当TDZ03mg/L 时, NAA 1mg/L 促分化作用显著优于NAA5mg/L。在TDZ、NAA 浓度相同的情况下，随着6-BA 浓度的升高，分化率提高。但随着继代次数的增多，含高浓度6-BA的27 号培养基分化率略有下降，甚至有个别畸形芽产生，说明高浓度细胞分裂素对短期的分化有促进作用[9]，但继代数次后，芽已经萌动，自身具有分化能力，需适当降低6-BA 浓度进行壮苗，以避免畸形芽产生。因此，在增殖过程中交替使用分化增殖系数较高的19 号培养基和27 号培养基，既可保证较高的芽分化率，又可使继代苗生长健壮，减少畸形芽。4 生根诱导增殖芽3～5cm 长时，转接到生根培养基上培养约10d 后，可见到根生成（图版-c）。接种20d 后统计生根结果（表4）。从表4可见，所用培养基上都有根生成，说明美人蕉生根较容易；结合生根率和生长势，我们认为MS + 6-BA 0 + NAA 5培养基较适宜美人蕉生根。表2 不同植物生长调节剂组合的比较植物生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA 2,4-D KT TDZ分化率(%) 生根率(%) 备注1 0 0 0 0 02 9 0 0 0 0 33 参考[2]3 5 0 0 0 0 33 参考[3]4 3 0 0 0 0 675 2 1 0 0 0 006 2 5 0 0 0 677 2 2 0 0 0 08 0 0 4 0 09 0 0 2 1 0 参考[6]10 0 2 0 2 0 参考[7]11 0 0 0 0 2 012 0 1 0 0 2 33 参考[8]13 0 0 5 0 1 3314 0 0 1 0 1 6715 8 0 0 0 03 3316 5 0 5 0 03 00表3 不同生长调节剂配比对芽继代繁殖的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA TDZ接种数分化率(%)增值系数 生长势17 0 5 03 30 00d 20d ++18 0 5 30 30 67cd 50bc ++19 0 1 03 30 67a 67a ++20 0 1 30 30 33cd 46bc ++21 0 5 03 30 33c 60ab ++22 0 5 30 30 67d 33c ++23 0 1 03 30 67a 60ab ++24 0 1 30 30 33ab 57b +25 0 5 03 30 00b 53b ++26 0 5 30 30 67d 37c +27 0 1 03 30 00a 73a ++28 0 1 30 30 67d 37c +注：++ 表示生长势强；+表示生长势弱。同列中不同字母表示差异显著(P＜05＝，表4 同。表4 不同的生长调节剂配比对组培苗生根的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA接种数生根苗数生根率(%)植株生长势29 0 5 30 19 33b +30 0 0 30 21 00a ++31 0 5 30 20 67ab +++32 0 0 30 16 33c ++注：+++ 表示生长势强；++表示生长势中等；+表示生长势弱。第·36· 37 卷3 结 论美人蕉根茎生长在土壤中，无菌化操作较困难。灭菌试验表明，1%升汞震荡灭菌10min 效果较好，采回的外植体应尽快处理接种，放置时间过长伤口处易染菌，导致接种后褐化较严重。MS + 6-BA 0 + ZDT 03 + NAA 1 培养基能较好地诱导分化丛生芽，MS + 6-BA 0 + TDZ 03+ NAA 1 为较好的增殖培养基，在增殖培养过程中这两种配方交替使用效果更好；短时间使用高浓度生长调节剂对增殖有促进作用，但长时间使用高浓度生长调节剂会使组培苗质量下降。在试验中还发现，转接次数多的茎尖较转接次数少的分化率大，建议在接种后的10～20d 内及时转接。选用MS + 6-BA 0 + NAA 5 为生根培养基，生根率较高，根系粗壮、根毛密集，植株生长健壮（图版-d），且移栽成活率较高。参考文献:[1] Segeren W, et The genus Canna in Northern South America[J] Acta Bot N, 1971,20(6): 663-[2] 刘文萍,等 美人蕉茎尖组织培养及快繁技术[J] 北方园艺, 2001(6): [3] 丁爱萍,等 美人蕉组织培养及快速繁殖技术[J] 园林科技, 2006(1): 11-[4] Singh N D, et The effect of TDZ on organogenesis and somatic embryogenesis in pigeonpea (Cajanus cajan L Millsp)[J]Plant Science, 2003,164(3): 341-[5] 王关林,等 高活性细胞激动素TDZ 在植物组织培养中的应用[J] 植物学通报, 1997,14(3): 47-[6] 宣朴,等 生姜茎尖组培快繁技术研究[J] 西南农业学报, 2004,17(4): 484-[7] Kromer K, et In vitro cultures of meristem tips of Canna indica L[J] Acta Horticulturace, 1985,167: 279-[8] Vendrame W A, et In vitro propagation and plantlet regeneration from Doritaenopsis Purple Gem 'Ching Hua' flowerexplants[J] HortScience, 2007,42(5): 1 256-1 [9] 刘敏 花卉组织培养与工厂化生产[M] 北京: 地质出版社, 2002: 101-
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平均分达到高校要求，平均分也就是说二年半下来全部课程成绩平均分要达到75分。论文答辩达到良好成人本科学士学位英语考试合格。
大四最后有个考试，就是针对毕业生以前没过的课程。一般老师不会为难你的，毕竟老师也知道你要毕业了。挂的课多，补考不是问题，有些大四毕业时还补考高数、英语呢，所以毕业应该不难，关键是你能否按期拿到学位证的问题。仔细看看农大的学生手册，好像受处分、挂课五门以上、四级未达到要求、平均成绩70（工科65）以下的，没有学位，还得到时花3000买学位，愁啊~~你哪个院的？
首先论文你的基础格式要符合学校规范，其次书写的语句要通讯易懂，最后，论文里不能有错别字的，这些都要注意，再一个就是跟着老师修改意见修改就可以！
对于刚接触的毕业生来说，是非常困难的，论文写作的还有内容的一些规范都是需要掌握的，那么毕业论文写作要求有哪些呢？下面小编就来和大家详细的讲解一下。一．基本要求1．独立性：毕业论文必须经护生本人努力、指导老师指导下独立完成，不得弄虚作假，抄袭或下载他人成果。2．专业性：毕业论文的选题必须在护理学专业范围之内，并具有护理专业特点。3．鲜明性：论文应主题鲜明，论题、论点、论据一致，中心突出，论据充分，结论正确；结构紧凑，层次分明，格式规范，文字流畅，切忌错别字。4．标准化：论文中使用的度量单位一律采用国际标准单位。5．三线表：论文中图表具有代表性，对所使用的图表要给予解释，统一标注编号和图题，放置在论文的适当位置中，图表要清晰、简洁、比例适当。6．篇幅字数：篇幅在4000字左右（不含图表、等），不少于3500字。7．字形大小：为小二号宋体，标题为四号宋体加粗，正文用宋体小4号字，5倍行间距，A4纸打印，页边距：上、下各54cm，左、右各17cm，左侧装订，一式三份。护生同时应将毕业论文制作成Word电子文档（含初稿和正稿）上交学院。8．完整性：论文形式应完整，按照以下顺序装订毕业论文。（1） 论文封面（首页）（2） 论文目录（次页）（3） 报告（4） 论文选题（论文题目）、中文摘要（目的，方法，结果，结论）、关键词。（5） 论文正文（前言，方法，结果，讨论，结论）（6） 参考文献二．内容规范(一) 中文摘要语言精练、明确。包括4个主要内容，研究类文章的摘要包括研究目的，方法，结果和结论，约200个汉字左右，能够反应文章的主要内容；综述类文章只要介绍文章的主要内容即可。“摘要”二字下空一行打印摘要内容(四号宋体)。每段开头空二格，标点符号占一格。4个基本内容：目的：方法：结果：结论见附件样本(二) 选题：题目要简洁、明确、有概括性，字数不超过20个。自考本科生论文的选题在创新性上不做过度的要求，文题范围要适中，不要太广泛。如有很多考生的题目是XXX疾病的护理，这样的题目就太大，没有针对性，因为我们都知道一个疾病的护理包括很多方面，如急性发作期，稳定期，并发症等的护理，这样的题目没有针对性，不容易出现创新点。考生在选题时可以先抓住一个小的问题进行扩充到一个可以成文有一定创新性的范围。确定题目的同时要进行文献查阅，如果是已经发展完善的护理类别，考生就没必要在该方面浪费精力，应该及时改变方向。根据护理专业特点，内容和性质，分为临床护理研究，社区护理研究，护理教育研究以及护理管理研究选题指导见附件样本(三) 关键词从论文标题中或正文中选出35个最能表达主要内容的词作为关键词，附在摘要之后，不超过5个，能够代表文中的高频词。摘要内容后下空一行打印“关键词”三字（四号黑体），其后为关键词（四号宋体）。关键词数量为4～6个，每一关键词之间用逗号分开，最后一个关键词后不打标点符号。(四) 论文主体部分：正文采用小四号或五号宋体表格：表的编排一般是内容和测试项目由左至右横读，数据依序竖读，应有自明性。表应有编号，由“表”和从1开始的阿拉伯数字组成，例如“表1”、“表2”等。表的编号应一直连续到附录之前，并与章、条和图的编号无关。只有一个表时，仍应标为“表1”。表宜有表题，表题即表的名称，置于表的编号之后。表的编号和表题应置表上方的居中位置。如某个表需要转页接排，在随后的各页上应重复表的编号。编号后跟表题（可省略）和“（续）”，如所示：表1（续），续表均应重复表头和关于单位的陈述。1．前言(引言)是论文的开头部分，主要说明论文写作目的、现实意义、对所研究问题的认识，并提出本研究的重要价值和意义。前言应简明扼要，篇幅不宜过长。2．研究类型和研究方法介绍立题的依据，提出问题，本研究的目的和重要性，包括文献回顾的内容。正文的篇幅在4000字左右（不含表格、程序、参考文献等），不少于3500字。论文形式分为三种不同的文体，研究型论文、综述和经验介绍型论文，每一种论文均有不同的要求。第一研究型论文研究设计应包括如下的内容：1) 研究对象和地点：有清楚的纳入和排除标准，符合研究目的2) 抽样方法：科学合理，具有一定的代表性3) 研究工具：具有较好的信、效度，符合研究目的4) 观察指标：客观性，特异性，灵敏性，稳定性5) 资料收集方法：准确，真实，完整6) 分析方法：科学准确，如计量资料的统计描述、计数资料的统计描述、多个样本均数比较的方差分析、总体均数的估计和假设检验、X2检验等。7) 伦理学考量：保密、隐私、自主、无伤害、尊重原则8) 结果：a)表和图凡用文字能表达清楚的内容，尽量不用图和表。如果用，则文中不需重复其数据，但需摘述其主要内容。b)附表为“三”线表，需注明表号、标题。说明应简单扼要，与正文内容相符。c)结果的真实性和科学性应特别注意，不论阳性还是阴性的结果，都应客观报告出来。9) 讨论：撰写的内容应与结果密切相关，分析能够结合理论，文献阅读充分，文笔流畅。第二综述型论文主体内容：综合文献内容，归纳总结，有自己的想法，分层次进行叙述对全文内容进行总结，指出研究的前景。第三经验介绍型论文经验介绍：对自己的经验介绍详细，层次清楚效果评价：有敏感的评价指标，结果使人信服，此部分不可缺少。讨论：撰写的内容应与文章经验密切相关，分析能够结合理论，文献阅读充分，文笔流畅。(五) 参考文献：参考文献应另起一页，所列文件均空两个字起排，回行时顶格排，每个文件之后不加标点符号。⑴按论文中参考文献出现的先后顺序用阿拉伯数字连续编号，将序号置于方括号内，并视具体情况将序号作为上角标，或作为论文的组成部分。如：“……李××［1］对此作了研究，数学模型见文献［2］。”⑵参考文献中每条项目应齐全。文献中的作者不超过三位时全部列出；超过三位时一般只列前三位，后面加“等”字或“”；作者姓名之间用逗号分开；中外人名一律采用姓在前，名在后的著录法。
论文的关键目地是塑造学员灵活运用所教专业知识和专业技能，理论指导，单独解析，处理具体难题的工作能力，使学员获得从业本技术专业工作中和开展有关的基础训炼。论文应体现出创作者可以精确地把握所教的技术专业基本知识，基础学好灵活运用所教专业知识开展科研的方式，对所科学研究的题型有一定的体会心得，论文题目的范畴不适合过宽，一般挑选本学科某一关键难题的一个侧边。毕业论文主要是对学生这些基本要求的锻炼，其中包括：1、塑造学员灵活运用、推进与拓展所教的基础知识和专业技能，塑造学员单独解析、处理具体难题工作能力、塑造学员解决信息和信息内容的工作能力;2、塑造学员恰当的理论指导的工作态度，认真细致的科学态度;3、塑造学员开展社会发展调查报告;参考文献搜集、阅读文章和梳理、应用;明确提出论点论据、综合性论述、小结创作等专业技能。论文是大学毕业生总结性的单独工作，是学员应用在学校学习培训的基础知识和基础知识，去解析、处理一两个具体难题的实践活动锻练全过程，都是学员在学校学习培训期内学习培训成效的综合型小结，是全部课堂教学中必不可少的关键步骤。