芒果苷对脊髓损伤模型中氧化应激反应及线粒体途径凋亡的调节作用

脊髓损伤是脊柱骨折最严重的并发症，机械性压迫会直接对脊髓组织造成损伤并引起损伤平面以下的肢体功能出现障碍，严重者会出现瘫痪[1]。脊髓组织中神经元的再生能力较弱，发生损伤后的修复较为困难，单纯的结缔组织增生以及瘢痕修复难以修复神经功能。氧化应激反应以及线粒体途径细胞凋亡的过度激活是脊髓损伤过程中重要的病理环节，与局部组织中神经元的损害密切相关[2，3]。芒果苷是芒果叶内的主要活性成分，具有抗氧化和抗凋亡的生物学作用，已经被证实能够通过抑制氧化应激反应及细胞凋亡的方式来减轻脑组织及脑外伤过程中的缺血再灌注损伤，对神经元具有保护作用和促进再生作用[4，5]。但是，芒果苷对脊髓损伤是否具有保护作用尚未明确。在下列研究中，为了明确芒果苷对脊髓损伤的保护作用，我们具体分析了芒果苷对脊髓损伤模型中氧化应激反应及线粒体途径凋亡的调节作用。

1 材料及方法

1.1 一般材料

选择SPF级雄性SD大鼠作为实验动物，均购买于新疆医科大学动物中心，经医院伦理委员会批准后用于后续实验。动物实验器械及常规试剂由新疆医科大学动物中心提供，芒果苷购买于Sigma公司，放射免疫沉淀试剂盒及酶联免疫吸附试剂盒均购买于南京建成生物公司。

（6）实行全天候通关制度。随着我国邮轮旅游业的日益发展壮大，我国邮轮旅客通关量增速明显，邮轮到达码头的时间有时候会是随机的，旅客通关时间也是随机的，现有的口岸通关还不能满足这种随时通关的需求，因此，邮轮口岸提供随机性的服务的也是必不可少的，邮轮口岸建立必要的小时通关制度，全天候为邮轮乘客提供通关服务，满足邮轮乘客便捷通关的需求。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组及实验方法 SD大鼠随机分为对照组、损伤组、芒果苷组，每组各10只。损伤组和芒果苷组的大鼠按照下列方法建立脊髓损伤模型：腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后摆放俯卧位，做后正中切口后分离组织、显露T8-T10椎体，咬除椎板后显露T9脊髓；将10 g的打击锤放置在脊髓上方6 cm，松开打击锤并对脊髓造成60 g/cm的打击。对照组大鼠仅进行假手术操作，包括腹腔麻醉及T8-T10椎体的显露，不进行脊髓打击。造模完成后，芒果苷组按照25 mg/kg的剂量给予芒果苷腹腔注射，连续注射30天。

考虑到现有供应库存的优化，为商业地产供给侧结构改革做足准备工作。优化现有库存供给从以下三个措施展开：第一，结合城中村改造，提供更多户型可供消费者选择，缩短拆迁户的安置时间，节约政府资源，提高居民满意度。第二，加强现有住宅公共设施的配套建设，发挥商品住宅集群效应，促进土地资源合理有效利用。这对于吸引潜在居民有很大作用。第三，以优化现有的质量改进库存，将现有库存和人文，历史有机结合，整合资源，利用先进技术吸引和创造另一个领域的商业地产行业的潜力买家。

1.2.2 脊髓内指标检测方法 干预后30天，处死大鼠并解剖得到损伤的脊髓组织，超声裂解组织后得到组织悬液，采用放射免疫沉淀试剂盒测定ROS、H2O2、SOD、GSH-Px、CAT的含量，采用酶联免疫吸附试剂盒测定SKIP、ASK1、Fas、tBid、APAF-1、Caspase-3的含量。

所谓的有机肥，其实就是所有含碳的有机物质的一种统称，详细点来讲，其实就是指动植物代谢产物或经过一系列物理化学变化而合成的含碳营养物质。其不仅可以为农作物的生长提供充分的营养物质，还能对土壤中的有机质含量进行有效地提升，进而最大程度的发挥各种肥料的肥效，为农作物的生长提供充足的养分。因此在农作物的生长过程中，相关的农业工作人员必须要对有机肥以及无机肥进行充分合理的利用，进而才能有效地存进农作物的正常生长，提升农作物的营养物质，对农作物的产量进行有效地提升。

1.3 统计学处理

损伤组大鼠脊髓组织中SKIP、ASK1、Fas、tBid、APAF-1、Caspase-3的含量显著高于对照组；芒果苷组大鼠脊髓组织中SKIP、ASK1、Fas、tBid、APAF-1、Caspase-3的含量显著低于损伤组。见表2。

2 结果

2.1 氧化应激指标

综上所述，在脊髓损伤过程中，氧化应激反应及线粒体途径凋亡均显著激活；芒果苷能够抑制脊髓损伤模型中的氧化应激反应及线粒体途径凋亡。

 

表1 三组大鼠脊髓组织中氧化应激指标的比较

  

组别nROSH2O2SODGSH-PxCAT对照组100.68±0.091.03±0.1627.96±5.2819.58±2.4713.26±1.84损伤组102.76±0.36∗4.66±0.67∗10.29±1.44∗7.68±0.93∗5.62±0.89∗芒果苷组101.14±0.16#1.92±0.25#19.34±2.42#13.42±1.95#8.94±1.05#

注：与对照组比较，*P<0.05；与损伤组比较，#P<0.05。

2.2 细胞凋亡指标

采用SPSS20.0软件录入数据并进行分析，三组间计量资料的比较采用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

 

表2 三组大鼠脊髓组织中细胞凋亡指标的比较

  

组别nSKIP(ng/mL)ASK1(ng/mL)Fas(pg/mL)tBid(ng/mL)APAF-1(pg/mL)Caspase-3(ng/mL)对照组100.93±0.111.67±0.20205.6±32.60.68±0.09176.3±22.52.26±0.36损伤组103.41±0.52∗5.68±0.72∗639.6±77.9∗2.79±0.46∗523.7±69.1∗8.69±1.03∗芒果苷组101.77±0.24#2.33±0.36#347.1±49.6#1.25±0.17#267.5±33.7#3.94±0.62#

注：与对照组比较，*P<0.05；与损伤组比较，#P<0.05。

3 讨论

脊髓损伤过程中氧自由基的生成不仅会通过引起细胞结构发生氧化反应来直接造成细胞损害，还能通过启动细胞的凋亡程序来造成神经元损害[14]。SKIP和ASK1是神经元内的凋亡上游调控分子，SKIP能够影响Rb与E2F1间的相互作用、阻碍细胞周期进程并诱导下游凋亡途径发生激活[15]，ASK1能够影响下游JNK及p38MAPK通路的功能、引起多种凋亡途径发生激活[16，17]。死亡受体途径和线粒体途径是细胞凋亡常见的调控机制。Fas是死亡受体凋亡途径的调控分子，与FasL识别后通过FADD来激活caspase-8，caspase-8一方面能够启动凋亡的级联激活反应，另一方面能够切割Bid并形成具有促凋亡活性的tBid[18]；APAF-1是线粒体途径凋亡的调控分子，从线粒体内进入胞浆的细胞色素C能够通过APAF-1来引起caspase-9活化，进而能够造成caspase-3活化并引起细胞凋亡[19]。我们通过分析脊髓损伤模型大鼠脊髓内上述凋亡分子含量的变化可知：损伤组大鼠脊髓组织中SKIP、ASK1、Fas、tBid、APAF-1、Caspase-3的含量显著高于对照组。这就说明在脊髓损伤过程中多种凋亡分子生成增多、细胞凋亡显著激活。为了进一步明确芒果苷对脊髓损伤的保护作用，我们对芒果苷干预后损伤的脊髓组织内凋亡分子含量的变化进行了分析，结果显示：芒果苷组大鼠脊髓组织中SKIP、ASK1、Fas、tBid、APAF-1、Caspase-3的含量显著低于损伤组。这就说明芒果苷能够减少脊髓损伤过程中凋亡分子的生成，进而抑制细胞凋亡的激活、有利于脊髓损伤内细胞的再生和修复。

脊髓损伤是临床上较为严重的创伤类型，氧化应激反应是造成脊髓发生损伤的重要病理环节[6，7]。氧自由基大量生成是氧化应激反应激活的特征，ROS、H2O2是常见的两种氧自由基形式，能够与脊髓组织中神经元内的脂质、蛋白质、核酸发生氧化反应并造成细胞损伤[8，9]。SOD、GSH-Px、CAT是局部组织中的抗氧化酶，SOD能够将ROS还原为H2O2和O2，而GSH-Px、CAT能够将H2O2还原为H2O[10，11]。在上述研究中，我们首先以SD大鼠为研究对象并建立了脊髓损伤模型，通过分析损伤模型大鼠脊髓组织中氧化应激指标的变化可知：损伤组大鼠脊髓组织中ROS、H2O2的含量显著高于对照组，SOD、GSH-Px、CAT的含量显著低于对照组。这就说明在脊髓损伤过程中氧自由基生成及抗氧化酶消耗增多、氧化应激反应显著激活。芒果苷是从芒果叶内提取得到的具有抗氧化和抗凋亡作用的活性成分，在脑组织及脑外伤模型内被证实能够抑制氧化应激反应及细胞凋亡，进而减轻脑组织的损伤[12，13]。为了明确芒果苷对脊髓损伤的保护作用，我们进一步分析芒果苷对脊髓损伤过程中氧化应激反应的影响，结果显示：芒果苷组大鼠脊髓组织中ROS、H2O2的含量显著低于损伤组，SOD、GSH-Px、CAT的含量显著高于损伤组。这就说明芒果苷能够减少脊髓损伤过程中氧自由基的生成及抗氧化酶的消耗，进而能够减轻氧化应激反应对脊髓的损伤并为脊髓损伤的修复创造有利条件。

损伤组大鼠脊髓组织中ROS、H2O2的含量显著高于对照组，SOD、GSH-Px、CAT的含量显著低于对照组；芒果苷组大鼠脊髓组织中ROS、H2O2的含量显著低于损伤组，SOD、GSH-Px、CAT的含量显著高于损伤组。见表1。

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