微型传感器论文

生物传感器的研究现状及应用摘要：简述了生物传感器尤其是微生物传感器近年来在发酵工业及环境监测领域中的研究与应用，对其发展前景及市场化作了预测及展望。生物电极是以固定化生物体组成作为分子识别元件的敏感材料，与氧电极、膜电极和燃料电极等构成生物传感器，在发酵工业、环境监测、食品监测、临床医学等方面得到广泛的应用。生物传感器专一性好、易操作、设备简单、测量快速准确、适用范围广。随着固定化技术的发展，生物传感器在市场上具有极强的竞争力。 关键词：生物传感器；发酵工业；环境监测。中图分类号：3 文献标识码：a 文章编号：1006-883x(2002)10-0001-06一、 引言 从1962年，clark和lyons最先提出生物传感器的设想距今已有40 年。生物传感器在发酵工艺、环境监测、食品工程、临床医学、军事及军事医学等方面得到了深度重视和广泛应用。在最初15年里，生物传感器主要是以研制酶电极制作的生物传感器为主，但是由于酶的价格昂贵并不够稳定，因此以酶作为敏感材料的传感器，其应用受到一定的限制。近些年来，微生物固定化技术的不断发展，产生了微生物电极。微生物电极以微生物活体作为分子识别元件，与酶电极相比有其独到之处。它可以克服价格昂贵、提取困难及不稳定等弱点。此外，还可以同时利用微生物体内的辅酶处理复杂反应。而目前，光纤生物传感器的应用也越来越广泛。而且随着聚合酶链式反应技术（pcr）的发展，应用pcr的dna生物传感器也越来越多。二、 研究现状及主要应用领域 1、 发酵工业各种生物传感器中，微生物传感器最适合发酵工业的测定。因为发酵过程中常存在对酶的干扰物质，并且发酵液往往不是清澈透明的，不适用于光谱等方法测定。而应用微生物传感器则极有可能消除干扰，并且不受发酵液混浊程度的限制。同时，由于发酵工业是大规模的生产，微生物传感器其成本低设备简单的特点使其具有极大的优势。(1) 原材料及代谢产物的测定微生物传感器可用于原材料如糖蜜、乙酸等的测定，代谢产物如头孢霉素、谷氨酸、甲酸、甲烷、醇类、青霉素、乳酸等的测定。测量的原理基本上都是用适合的微生物电极与氧电极组成，利用微生物的同化作用耗氧，通过测量氧电极电流的变化量来测量氧气的减少量，从而达到测量底物浓度的目的。在各种原材料中葡萄糖的测定对过程控制尤其重要，用荧光假单胞菌（psoudomonas fluorescens）代谢消耗葡萄糖的作用，通过氧电极进行检测，可以估计葡萄糖的浓度。这种微生物电极和葡萄糖酶电极型相比，测定结果是类似的，而微生物电极灵敏度高，重复实用性好，而且不必使用昂贵的葡萄糖酶。当乙酸用作碳源进行微生物培养时，乙酸含量高于某一浓度会抑制微生物的生长，因此需要在线测定。用固定化酵母（trichosporon brassicae），透气膜和氧电极组成的微生物传感器可以测定乙酸的浓度。此外，还有用大肠杆菌（li）组合二氧化碳气敏电极，可以构成测定谷氨酸的微生物传感器，将柠檬酸杆菌完整细胞固定化在胶原蛋白膜内，由细菌―胶原蛋白膜反应器和组合式玻璃电极构成的微生物传感器可应用于发酵液中头孢酶素的测定等等。(2) 微生物细胞总数的测定在发酵控制方面，一直需要直接测定细胞数目的简单而连续的方法。人们发现在阳极表面，细菌可以直接被氧化并产生电流。这种电化学系统已应用于细胞数目的测定，其结果与传统的菌斑计数法测细胞数是相同的[1]。(3) 代谢试验的鉴定传统的微生物代谢类型的鉴定都是根据微生物在某种培养基上的生长情况进行的。这些实验方法需要较长的培养时间和专门的技术。微生物对底物的同化作用可以通过其呼吸活性进行测定。用氧电极可以直接测量微生物的呼吸活性。因此，可以用微生物传感器来测定微生物的代谢特征。这个系统已用于微生物的简单鉴定、微生物培养基的选择、微生物酶活性的测定、废水中可被生物降解的物质估计、用于废水处理的微生物选择、活性污泥的同化作用试验、生物降解物的确定、微生物的保存方法选择等[2]。2、 环境监测(1) 生化需氧量的测定生化需氧量（biochemical oxygen demand ?bod）的测定是监测水体被有机物污染状况的最常用指标。常规的bod测定需要5天的培养期，操作复杂、重复性差、耗时耗力、干扰性大，不宜现场监测，所以迫切需要一种操作简单、快速准确、自动化程度高、适用广的新方法来测定。目前，有研究人员分离了两种新的酵母菌种spt1和spt2，并将其固定在玻璃碳极上以构成微生物传感器用于测量bod，其重复性在±10%以内。将该传感器用于测量纸浆厂污水中bod的测定，其测量最小值可达2 mg/l，所用时间为5min[3]。还有一种新的微生物传感器，用耐高渗透压的酵母菌种作为敏感材料，在高渗透压下可以正常工作。并且其菌株可长期干燥保存，浸泡后即恢复活性，为海水中bod的测定提供了快捷简便的方法[4]。 除了微生物传感器，还有一种光纤生物传感器已经研制出来用于测定河水中较低的bod值。该传感器的反应时间是15min，最适工作条件为30°c，ph=7。这个传感器系统几乎不受氯离子的影响（在1000mg/l范围内），并且不被重金属（fe3+、cu2+、mn2+、cr3+、zn2+）所影响。该传感器已经应用于河水bod的测定，并且获得了较好的结果[4]。现在有一种将bod生物传感器经过光处理（即以tio2作为半导体，用6 w灯照射约4min）后，灵敏度大大提高，很适用于河水中较低bod的测量[5]。同时，一种紧凑的光学生物传感器已经发展出来用于同时测量多重样品的bod值。它使用三对发光二极管和硅光电二极管，假单胞细菌（pseudomonas fluorescens）用光致交联的树脂固定在反应器的底层，该测量方法既迅速又简便，在4℃下可使用六周，已经用于工厂废水处理的过程中[5]。(2) 各种污染物的测定常用的重要污染指标有氨、亚硝酸盐、硫化物、磷酸盐、致癌物质与致变物质、重金属离子、酚类化合物、表面活性剂等物质的浓度。目前已经研制出了多种测量各类污染物的生物传感器并已投入实际应用中了。测量氨和硝酸盐的微生物传感器，多是用从废水处理装置中分离出来的硝化细菌和氧电极组合构成。目前有一种微生物传感器可以在黑暗和有光的条件下测量硝酸盐和亚硝酸盐(nox-)，它在盐环境下的测量使得它可以不受其他种类的氮的氧化物的影响。用它对河口的nox-进行了测量，其效果较好[6]。硫化物的测定是用从硫铁矿附近酸性土壤中分离筛选得到的专性、自养、好氧性氧化硫硫杆菌制成的微生物传感器。在ph=5、31℃时一周测量200余次，活性保持不变，两周后活性降低20%。传感器寿命为7天，其设备简单，成本低，操作方便。目前还有用一种光微生物电极测硫化物含量，所用细菌是sp，与氢电极连接构成[7]。最近科学家们在污染区分离出一种能够发荧光的细菌，此种细菌含有荧光基因，在污染源的刺激下能够产生荧光蛋白，从而发出荧光。可以通过遗传工程的方法将这种基因导入合适的细菌内，制成微生物传感器，用于环境监测。现在已经将荧光素酶导入大肠杆菌（li）中，用来检测砷的有毒化合物[8]。水体中酚类和表面活性剂的浓度测定已经有了很大的发展。目前，有9种革兰氏阴性细菌从西西伯利亚石油盆地的土壤中分离出来，以酚作为唯一的碳源和能源。这些菌种可以提高生物传感器的感受器部分的灵敏度。它对酚的监测极限为5 ´10-9mol。该传感器工作的最适条件为：ph=4、35℃，连续工作时间为30h[9]。还有一种假单胞菌属（pseudomonas rathonis）制成的测量表面活性剂浓度的电流型生物传感器，将微生物细胞固定在凝胶（琼脂、琼脂糖和海藻酸钙盐）和聚乙醇膜上，可以用层析试纸gf/a，或者是谷氨酸醛引起的微生物细胞在凝胶中的交联，长距离的保持它们在高浓度表面活性剂检测中的活性和生长力。该传感器能在测量结束后很快的恢复敏感元件的活性[10]。还有一种电流式生物传感器，用于测定有机磷杀虫剂，使用的是人造酶。利用有机磷杀虫剂水解酶，对硝基酚和二乙基酚的测量极限为100´10-9mol，在40℃只要4min[11]。还有一种新发展起来的磷酸盐生物传感器，使用丙酮酸氧化酶g，与自动系统cl-fia台式电脑结合，可以检测(32~96)´10-9mol的磷酸盐，在25°c下可以使用两周以上，重复性高[12]。最近，有一种新型的微生物传感器，用细菌细胞作为生物组成部分，测定地表水中壬基酚（nonyl-phenol etoxylate --np-80e）的含量。用一个电流型氧电极作传感器，微生物细胞固定在氧电极上的透析膜上，其测量原理是测量毛孢子菌属（trichosporum grablata）细胞的呼吸活性。该生物传感器的反应时间为15~20min，寿命为7~10天（用于连续测定时）。在浓度范围5~0mg/l内，电信号与np-80e浓度呈线性关系，很适合于污染的地表水中分子表面活性剂的检测[13]。除此之外，污水中重金属离子浓度的测定也是不容忽视的。目前已经成功设计了一个完整的，基于固定化微生物和生物体发光测量技术上的重金属离子生物有效性测定的监测和分析系统。将弧菌属细菌（vibrio fischeri）体内的一个操纵子在一个铜诱导启动子的控制下导入产碱杆菌属细菌（alcaligenes eutrophus (ae1239)）中，细菌在铜离子的诱导下发光，发光程度与离子浓度成正比。将微生物和光纤一起包埋在聚合物基质中，可以获得灵敏度高、选择性好、测量范围广、储藏稳定性强的生物传感器。目前，这种微生物传感器可以达到最低测量浓度1´10-9mol[14]。还有一种专门测量铜离子的电流型微生物传感器。它用酒酿酵母（saccharomyces cerevisiae）重组菌株作为生物元件，这些菌株带有酒酿酵母cup1基因上的铜离子诱导启动子与大肠杆菌lacz基因的融合体。其工作原理，首先是cup1启动子被cu2+诱导，随后乳糖被用作底物进行测量。如果cu2+存在于溶液中，这些重组体细菌就可以利用乳糖作为碳源，这将导致这些好氧细胞需氧量的改变。该生物传感器可以在浓度范围(5~2)´10-3mol范围内测定cuso4溶液。目前已经将各类金属离子诱导启动子转入大肠杆菌中，使得大肠杆菌会在含有各种金属离子的的溶液中出现发光反应。根据它发光的强度可以测定重金属离子的浓度，其测量范围可以从纳摩尔到微摩尔，所需时间为60~100min[15][16]。用于测量污水中锌浓度的生物传感器也已经研制成功，使用嗜碱性细菌alcaligenes cutrophus，并用于对污水中锌的浓度和生物有效性进行测量，其结果令人满意[17]。估测河口出水流污染情况的海藻传感器是由一种螺旋藻属蓝细菌（ cyanobacterium spirlina subsalsa）和一个气敏电极构成的。通过监测光合作用被抑制的程度来估测由于环境污染物的存在而引起水的毒性变化。以标准天然水为介质，对三种主要污染物（重金属、除草剂、氨基甲酸盐杀虫剂）的不同浓度进行了测定，均可监测到它们的有毒反应，重复性和再生性都很高[18]。近来由于聚合酶链式反应技术（pcr）的迅猛发展及其在环境监测方面的广泛应用，不少科学家开始着手于将它与生物传感器技术结合应用。有一种应用pcr技术的dna压电生物传感器，可以测定一种特殊的细菌毒素。将生物素酰化的探针固定在装有链酶抗生素铂金表面的石英晶体上，用1´10-6mol的盐酸可以使循环式测量在同一晶体表面进行。用细菌中提取的dna样品进行同样的杂交反应并由pcr放大，产物为气单胞菌属（aeromonas hydrophila）的一种特殊基因片断。这种压电生物传感器可以鉴别样品中是否含有这种基因，这为从水样中检测是否含带有这种病原的各种气单胞菌提供了可能[19]。还有一种通道生物传感器可以检测浮游植物和水母等生物体产生的腰鞭毛虫神经毒素等毒性物质，目前已经能够测量在一个浮游生物细胞内含有的极微量的psp毒素[20]。dna传感器也在迅速的得到应用，目前有一种小型化dna生物传感器，能将dna识别信号转换为电信号，用于测量水样中隐孢子和其他水源传染体。该传感器着重于改进核酸的识别作用和加强该传感器的特异性和灵敏性，并寻求将杂交信号转化为有用信号的新方法，目前研究工作为识别装置和转换装置的一体化[21]。微藻素是一种从蓝藻细菌引起的水华中产生的细菌肝毒素，一种固定有表面细胞质粒基因组的生物传感器已经制得，用于测量水中微藻素的含量，它直接的测量范围是50~1000 ´10-6g/l[22]。 一种基于酶的抑制性分析的多重生物传感器用于测量毒性物质的设想也已经提出。在这种多重生物传感器中，应用了两种传导器―对ph敏感的电子晶体管和热敏性的薄膜电极，以及三种酶―尿素酶、乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶。该生物传感器的性能已经得到测试，效果较好[23]。除了发酵工业和环境监测，生物传感器还深入的应用于食品工程、临床医学、军事及军事医学等领域，主要用于测量葡萄糖、乙酸、乳酸、乳糖、尿酸、尿素、抗生素、谷氨酸等各种氨基酸，以及各种致癌和致变物质。三、 讨论与展望 美国的harold weetal指出，生物传感器商品化要具备以下几个条件：足够的敏感性和准确性、易操作、价格便宜、易于批量生产、生产过程中进行质量监测。其中，价格便宜决定了传感器在市场上有无竞争力。而在各种生物传感器中，微生物传感器最大的优点就是成本低、操作简便、设备简单，因此其在市场上的前景是十分巨大和诱人的。相比起来，酶生物传感器等的价格就比较昂贵。但微生物传感器也有其自身的缺点，主要的缺点就是选择性不够好，这是由于在微生物细胞中含有多种酶引起的。现已有报道加专门抑制剂以解决微生物电极的选择性问题。除此之外，微生物固定化方法也需要进一步完善，首先要尽可能保证细胞的活性，其次细胞与基础膜结合要牢固，以避免细胞的流失。另外，微生物膜的长期保存问题也待进一步的改进，否则难于实现大规模的商品化。 总之，常用的微生物电极和酶电极在各种应用中各有其优越之处。若容易获得稳定、高活性、低成本的游离酶，则酶电极对使用者来说是最理想的。相反的，若生物催化需经过复杂途径，需要辅酶，或所需酶不宜分离或不稳定时，微生物电极则是更理想的选择。而其他各种形式的生物传感器也在蓬勃发展中，其应用也越来越广泛。随着固定化技术的进一步完善，随着人们对生物体认识的不断深入，生物传感器必将在市场上开辟出一片新的天地。--------------------------------------------------------------------------------参考文献[1]韩树波，郭光美，李新等伏安型细菌总数生物传感器的研究与应用[j]华夏医学，2000，63（2）：49-52 [2]蔡豪斌微生物活细胞检测生物传感器的研究[j] 华夏医学，2000，13（3）：252-256[3] trosok sp, driscoll bt, luong jht mediated microbial biosensor using a novel yeast strain for wastewater bod measurement[j] applied micreobiology and biotechnology，2001， 56 (3-4): 550-554 [4] 张悦,王建龙，李花子等生物传感器快速测定bod在海洋监测中的应用[j]海洋环境科学，2001，20(1)：50-54[5] yoshida n, mcniven sj, yoshida a,a compact optical system for multi-determination of biochemical oxygen demand using disposable strips[j] field analytical chemistry and technology，2001，5 (5): 222-227[6] meyer rl, kjaer t, revsbech use of nox- microsensors to estimate the activity of sediment nitrification and nox- consumption along an estuarine 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发表论文九十多篇论文目录如下1 空间电磁环境监测用双探针式星载电场探测仪 电子与信息学报 2012-10-152 基于纳米金修饰的两种无汞型重金属微传感器的对比研究 分析化学 2012-12-153 SOI微型电场传感器的设计与测试 电子与信息学报 2011-11-154 基于混合SAMs包裹的纳米团簇和SPA的抗体固定方法用于糖化血红蛋白免疫场效应型传感器的制备(英文) 纳米技术与精密工程 2011-11-155 用于氨氮检测的薄层氨气微传感芯片及其系统研究 分析化学 2012-02-156 基于三维纳米银修饰电极的硝酸根微型传感芯片研究 化学学报 2012-02-147 用于氨氮检测的无透气膜安培型氨气微传感器及系统 纳米技术与精密工程 2012-03-158 用于氨氮检测的三维微纳氨气传感芯片及系统研究 电子与信息学报 2012-05-159 基于L波段气象雷达的空中三维电场探测系统 电子与信息学报 2012-07-1510 非接触式表面电势测量的MEMS微型静电压仪 仪表技术与传感器 2009-10-1511 微型电场传感器的结构释放过程中粘连现象的控制方法 仪表技术与传感器 2009-10-1512 基于蓝牙的便携式心电监护系统的设计 科学技术与工程 2011-06-1813 基于分子印迹技术的尿素仿生微传感器 纳米技术与精密工程 2011-09-1514 基于微型氨气敏感单元的氨氮检测系统研究 仪器仪表学报 2011-09-1515 基于铜纳米簇的硝酸根微传感器的研究 分析化学 2011-11-1516 基于Labview的微型电场传感器自动标定系统 信息与电子工程 2011-10-2517 基于双光栅的马赫-曾德尔干涉仪的初步研制 光学学报 2009-07-1518 尾迹对卫星周围等离子体扰动特性分析 宇航学报 2010-02-2819 三维立体结构微纳电极研究 分析化学 2010-05-1520 热驱动微型电场传感器干燥技术 传感技术学报 2010-06-2021 新型推挽激励的谐振式微机械静电场传感器 纳米技术与精密工程 2010-07-1522 Si-玻璃阳极键合失效机理研究 微纳电子技术 2010-10-1523 基于CPLD和DSP的不同采样速率多路数据采集系统的设 科学技术与工程 2009-04-1524 伸杆对星载电场探测仪的影响研究 电子与信息学报 2009-04-1525 电化学聚合吡咯掺杂蛋白A固定抗体的安培型沙门氏菌微传感器 分析化学 2009-04-1526 光波导耦合的表面等离子体共振光谱传感器实时监测表面生化反应 分析化学 2009-04-1527 用于水质检测的微传感器及微系统 微纳电子技术 2009-06-1528 一种闭环自激式驱动的硅微机械电场传感器 电子与信息学报 2009-11-1529 圆柱面和球面真空微电子二极管内电子渡越时间的计算 真空电子技术 2009-12-2530 快速检测糖化血红蛋白的免疫微传感器 纳米技术与精密工程 2010-01-1531 新型三维电场传感器原理及试验结果 电子器件 2006-02-2632 平面平行真空微电子二极管中二分之三次方关系式的应用 真空电子技术 2006-02-2533 毛细作用驱动的MEMS流体自组装模拟仿真 微纳电子技术 2006-05-1534 基于微机电系统技术和纳米金自组装膜的安培型免疫传感器研究 分析化学 2006-05-3035 语种确认中基于段长的语言模型修正方法 计算机应用研究 2006-07-0136 界面张力驱动的微粒自组装研究 仪表技术与传感器 2006-06-3037 两种热驱动结构在微型电场传感器中的应用 半导体学报 2006-09-3038 一种基于微加工技术的微型电场传感器的设计与制造 电子器件 2006-06-2639 空中三维电场探测系统 电子器件 2006-06-2640 基于SOC的有机膜REFETs研究 纳米技术与精密工程 2006-09-3041 用于免疫微传感器的CMOS微弱电流读出电路 电子器件 2006-08-2642 一种小型三维电场传感器 仪器仪表学报 2006-11-3043 基于Ppy敏感膜的pH-ISFET研制 仪器仪表学报 2006-12-3044 基于导电聚合膜及MEMS技术的安培免疫传感器 电子器件 2007-02-2845 新型的ISFET微传感器读出电路单芯片集成研究 电子学报 2007-02-2846 小型三维电场传感器设计与测试 电子与信息学报 2007-04-3047 MEMS工艺制备pH-ISFET/REFET功能膜研究 电子器件 2007-06-1548 一种用于MEMS电场传感器的CMOS可控增益前置放大电路 电子器件 2007-06-1549 悬浮栅结构ISFET动态特性的HSPICE仿真 微纳电子技术 2007-08-1550 低轨道卫星表面充电模拟 微纳电子技术 2007-08-1551 聚合物在pH-ISFET研究中的应用 传感器与微系统 2007-04-2052 空中三维电场传感器及其标定方法研究 微纳电子技术 2007-08-1553 基于免疫微传感器的微流体系统 微纳电子技术 2007-08-1554 新型pH-ISFET芯片系统研究 电子与信息学报 2007-10-1555 基于GprMax粮库异物微波探测传感系统的仿真 河南工业大学学报(自然科学版) 2008-12-2056 平滑型耐高温碳场发射体SCFE在真空X射线管内的试用 液晶与显示 2008-04-1557 碳场电子发射体的应用研究 真空科学与技术学报 2008-05-1558 三维电场传感器仿真优化及性能测试 传感技术学报 2008-06-1559 基于电化学共聚蛋白A固定抗体的安培型免疫微传感器 纳米技术与精密工程 2008-09-1560 一种用于薄膜热容测量的微热量计的设计与制作 微纳电子技术 2003-08-2561 基于MEMS技术的微型电场传感器设计与仿真 微纳电子技术 2003-08-2562 SU-8微针执行器的研究 微纳电子技术 2003-08-2563 基于单片机的电感测量系统 仪表技术与传感器 2005-01-2564 Si_3N_4微尺度薄膜比热特性测量研究 测控技术 2004-03-1865 用于多参数生化检测微系统的葡萄糖传感器的研究 测控技术 2004-04-1866 新型旋片式空中电场传感器及应用 电子与信息学报 2004-04-2067 基于SOI衬底加工的微型电场传感器研究(英文) 纳米技术与精密工程 2004-12-3068 聚酰亚胺振动膜微型电场传感器 微纳电子技术 2004-12-1569 固体微/纳米尺度传热理论研究进展 物理学进展 2004-10-3070 薄膜热导率测量结构的研究 仪器仪表学报 2004-12-3071 新型微电极葡萄糖传感器 仪器仪表学报 2004-12-3072 基于SU-8胶的微针执行器的研制 仪器仪表学报 2004-12-3073 体硅加工微电极传感器研究 2004-12-3074 基于MEMS的生物微传感技术 2005-02-2076 MEMS中的微组装技术 新技术新工艺 2005-01-2577 多驱动电极垂直限幅振动式微型电场传感器 电子器件 2005-03-2678 便携式多参数生化检测仪的研制 广西师范大学学报(自然科学版) 2005-03-2579 微尺度薄膜热导率测试技术 物理学进展 2002-09-2080 硅尖阵列-敏感薄膜复合型阴极真空微电子压力传感器特性的测试 液晶与显示 2002-02-2881 多能谱电子束能量分布的蒙特卡罗模拟和空间电荷效应 电子科学学刊 1999-08-1582 TiNi形状记忆薄膜的光刻新工艺 仪器仪表学报 2001-12-3083 全玻璃平板型真空荧光光源的工艺探讨 液晶与显示 2001-12-1584 平行平面形真空微电子二极管中的二分之三次方关系式 真空电子技术 2001-06-3085 阴极-敏感膜复合型真空微电子压力传感器研究 电子与信息学报 2001-01-1586 阵列场发射电子源的新进展 电子与信息学报 2001-05-1587 台阶阵列阴极真空微电子压力传感器研究 功能材料与器件学报 1996-09-3088 新型真空微电子压力传感器特性研究和实验制作 半导体学报 1997-12-0889 真空微电子器件的进展与问题 电子科学学刊 1997-10-1590 双栅极场发射阵列的特性模拟与设计 电子科学学刊 1998-02-1591 扫描电子束曝光机复合物镜的研究与设计 电子科学学刊 1991-05-0192 一种极低场曲复合聚焦偏转系统的设计 电子学报 1991-01-31

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