分子诊断学杂志电子版百度云

应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出诊断的技术，称为____。分子诊断是预测诊断的___方法，既可以进行个体____的诊断，也可以进行___诊断。分子诊断的材料包括___、___和___。

承担课题　　1）乌司他丁对百草枯中毒性肺损伤细胞因子的作用研究及分子机制探讨 BY2010KJ039 滨州医学院科技计划　　2）血液灌流干预下百草枯中毒患者血浆百草枯浓度、血清细胞因子变化规律及干预指标的建立 滨州医学院科技计划　　发表论文　　1）依达拉丰治疗百草枯中毒43例分析，内科急重危杂志，2008；　　2）早期人工通气对急性有机磷农药中毒并呼衰患者预后影响，山东医药，2009；　　3）应用卡维地洛治疗急性心肌梗死早期快速心律失常临床探讨，中国实用医药，2009；　　4）小剂量阿托品治疗急性重度有机磷中毒207例临床疗效分析，中国临床实用医学，　　主编、参编著作、教材：　　1）心电图诊断线索与失误，人民军医出版社，2010。　　学术奖励和荣誉称号：　　1）缬沙坦联合依那普利对充血性心力衰竭患者促炎细胞因子的影响临床研究，滨州市科技进步一等奖 200407；　　2）超早期脑梗赛的急诊靶血管内接触性溶栓和局部扩容治疗及神经外科住院病人感染情况调查分析，州市科技进步一等奖 200407。　　3）2010年度滨州医学院优秀教师。

二、思考题 标记免疫分析技术的种类及常用标记物。种类：酶联免疫吸附分析 ，免疫荧光分析，放射免疫分析，化学发光免疫分析，电化学发光免疫分析，金标免疫分析，时间分辨荧光免疫分析常见示踪物:酶、放射性核素、镧系稀土元素螯合物、发光剂 ELISA技术类型及应用。技术类型: 双抗体夹心法测抗原，双抗原夹心法测抗体，间接法测抗体，竞争法测抗体，竞争法测抗原，捕获包被法测抗体，BAS-ELISA法应用:(1)在医学检测中的应用：病原体及其抗体的检测 蛋白质的检测 非肽类激素的检测 药物的检测 毒品检测(2)在食品检测中的应用：食品微生物的检测 食品毒素的检测 食品中残留农药的检测 食品中残留抗生素的检测转基因食品的检测 双脱氧终止法测序的原理。利用DNA聚合酶，以单链DNA为模板，以dNTP(含标记的dNTP)为底物，在四组互相独立的反应体系中分别加入不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNPT)作为链反应终止剂，根据碱基配对原则，在测序引物引导下，合成四组有序梯度的互补DNA链，然后通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后直接识读待测DNA的序列。 PCR的基本原理及应用。原理:是模拟体内DNA半保留复制过程，通过变性、退火、延伸三步反应的循环完成；靶基因的双链DNA通过变性解链为单链，特异的引物通；过退火与单链DNA模板结合，在靶DNA的指导下引物的3’末端延伸靶DNA的互补链完成一个循环，重复这一过程，使目的DNA片段得到扩增。应用:目的基因的克隆；基因的体外突变；DNA和RNA的微量分析；DNA序列测定；基因突变分析 荧光定量PCR的原理。荧光定量PCR（FQ-PCR）基于荧光能量传递技术（fluorescence resonance energy transfer FRET），通过受体发色团之间偶极-偶极相互作用，能量从供体发色团转移到受体发色团，转移效率与两个发色团之间距离的6次幂倒数成比例，受体荧光染料发射出的荧光讯号强度与DNA产量成正比，检测PCR过程的荧光讯号便可得知靶序列初始浓度。 荧光定量PCR技术（FQ-PCR）在HBV检测中的应用。HBV感染的早期诊断；监测治疗效果；判断病情，指导制订合理的治疗方案；在乙肝病毒耐药检测中的应用；血液制品和献血员的筛选，隐匿性肝炎的发现；HBV-DNA定量有助于指导怀孕，降低宫内感染的发生率；筛选肝炎的治疗药物； 基因芯片和蛋白质芯片的定义及其应用。(1) 基因芯片:1) 定义:又称DNA芯片或DNA微阵列，将大量的基因片断有序地、高密度地排列在玻璃片或纤维膜等载体上，称之为基因芯片。2)应用:基因表达分析、DNA序列测定、寻找新基因、基因突变和多态性的检测、疾病诊断药物筛选、疾病耐药性研究及检测、个体化医疗检测(2)蛋白芯片:1)定义:将各种蛋白质有序地固定于滴定板、滤膜和载玻片等各种载体上成为检测用的芯片，然后用荧光素标记蛋白质或其它成分与芯片作用，经漂洗后用荧光扫描仪或激光共聚焦扫描技术，测定芯片上各点的荧光强度，通过荧光强度分析蛋白质与蛋白质之间相互作用的关系，由此达到测定各种蛋白质功能的目的。 2)应用:感染性疾病检测、确诊；肿瘤标记物的诊断；药物靶点筛选；构建蛋白质表达谱；进行抗原-抗体筛选；蛋白质-蛋白质相互作用等 HIV常用的分子诊断方法？(1)初筛试验:用于对检测对象感染情况的初步筛查，检测结果可能会有假阳性，不能发抗体阳性报告。1）血清学检测方法:酶联免疫法，颗粒凝集法，免疫荧光法，胶体硒或金法,时间分辨荧光免疫分析法2)唾液检测试剂3)尿液检测试剂(2)确证试验:免疫印迹（WB）；免疫荧光(IFA)；条带免疫(LIA)；放射免疫沉淀(RIPA)（3）抗原或核酸检测:P24抗原检测；HIV RNA的检测 常见的单基因和多基因疾病名称。(1) 单基因疾病:血红蛋白病、肌营养不良症、血友病、苯丙酮酸尿症、Wilson病、G6PD缺乏症、Huntington病、脆性X综合症(2) 多基因疾病:肿瘤、糖尿病、家族性高脂血症型、高血压 如何对一种新发传染病进行分子诊断。 对新发传染病人接触的生物、以及病人外周血、唾液、痰液等可能含有病原体的物质进行培养，对培养液进行抗原提纯进行免疫学检测、通过RNA提取做RT-PCR处理、DNA提取做PCR处理，电泳鉴定及测序，与已知病原体序列作比对，以发现新发传染病的病原体的科别。 直接和间接免疫荧光分析法需设置的对照。——免疫荧光技术（FIA）直接法需设置的对照：①标本自发荧光对照：标本加1～2滴01mol/L pH4的PBS。②特异性对照（抑制试验）：标本加未标记的特异性抗体，再加荧光标记的特异性抗体。③阳性对照：已知的阳性标本加荧光标记的特异性抗体。 间接法需设置的对照①阳性对照：阳性血清+荧光标记物。②阴性对照：阴性血清+荧光标记物。③荧光标记物对照：PBS+荧光标记物。 影响抗原抗体反应的主要因素。影响抗原抗体反应的因素(1)抗原抗体的性质 (2)温度 (3)酸碱度（PH） (4)电解质（离子强度） 放射性核素的选择原则及常见的放射性核素。选择原则: 高比活度；适宜的半衰期；对抗原和抗体损害小；容易标记常见放射核素: 14C 和3H，131I和125I，32P，35S 癌基因和抑癌基因名称。癌基因:ras基因、mys基因、表皮生长因子受体抑癌基因:Rb基因、p53基因 核酸分子杂交实验中探针的标记方法和常用的标记物。（1） 放射性同位素标记 常用标记物有: 32P、3H、35S、131I、125I等（2） 非同位素标记 常用标记物有:生物素、地高辛、光敏生物素、荧光素 免疫学诊断方法的敏感性和特异性的计算方法。免疫学检测方法的评估敏感性=真阳性/(真阳性+假阴性) ´100%, 特异性=真阴性/(假阳性+真阴性) ´100% HCV和HPV的分型。HCV基因分型的系统概况1）HCV 基因组的核苷酸序列的变异超过30% 时, 定为基因型, 目前有11 个基因型2）HCV基因组的核苷酸变异超过20%时,定为基因亚型( subtypes),目前有80多个基因亚型 3）HCV 基因组的核苷酸序列变异超过10%时, 定为分离株( isolate)4）我国通用分型法：1a, 1b, 2a, 2b, 3a, 等 HPV有100多个型。 低危型：HPV 6、11引起良性病变 (尖锐湿疣、喉乳头瘤等) 高危型：HPV 16、18引起恶性肿瘤 (宫颈癌、肛门癌、口腔癌等) 免疫荧光分析技术中荧光色素应具备的条件。1） 能与蛋白质分子形成共价键，结合后不易解离，未结合及其降解产物易清除；2） 荧光效率高，与蛋白质结合仍保持较高的效率；3） 荧光的颜色与背景组织的颜色对比鲜明；4） 结合蛋白质后，不影响其活性；5） 标记方法简单，结合物稳定，易于保存；6） 安全无毒，不具有附加的抗原性。 基因芯片制备及检测方法。1）制备:原位合成——直接在芯片上用四种核苷酸合成所需的探针；合成点样——将已经合成好的探针定位在芯片上2）检测方法:荧光显影法、质谱法、化学发光法、光导纤维法、压电石英谐振法

一． 分子诊断技术和方法和创新，将为临床医学提供更准确的数据和信息　　从生物中心法则来看，分子诊断是通过检测基因的结构异常或表达异常，对人体的健康的疾病作出实验诊断，其技术的发展对疾病诊断学的影响是革命性的。图1列出了部分常见的分子诊断方法[7]。众所周知，在评估一项个体的生理或病理状态时，检测DNA可以反映基因的存在和缺陷，分析基因转录或翻译的产物（RNA或蛋白质）则反映基因的表达量，在21世纪，分子杂交、PCR和DNA序列测定仍然是检测DAN和RNA的基本技术和主流技术，Western blot、蛋白截短测试，质谱法将仍然是分析测定蛋白质的主要手段，但方法的创新是永恒的主题，通过这些基本技术的衍生，组合或联合形成新的分析方法（如基因芯片技术、蛋白芯片技术），提高分子诊断的特异性、敏感性和准确性、为临床医学提供更准确的数据和信息。　　二、分子诊断技术的发展和广泛应用，有利于临床医生对疾病进行全面分析　　分子诊断技术在检验医学的基础和临床研究中显示出强大的优势，例如，在乙型肝炎的诊断和治疗中，应用DNA定量技术为乙型肝炎的治疗和预后监测提供了重要依据，但近近不无症状乙型肝炎表面抗原携带者及乙型肝炎表面抗阴性者的人群中检出了前C终止密码子变异（G1896A）。研究表明，突变将导致乙型肝炎病毒继续复制，因此这一信息对于临床诊疗十分重要。又如庆大霉素等氨基糖苷类抗生素的毒副作用之一是诱发耳聋，且已证明线粒体DNA中12S rRNA基因A1555G突变和C1494T突变是氨基糖苷灶抗生素诱发非综合征耳聋的分子基础[8，9]，即只有带有突变的个体在使用氨基糖抗生素后才发生耳聋，因此，检测12S rRNA基因突变对于指导临床用药具有重要意义。再如，最近我国研制的一种传染性非典型肺炎又称严重急性呼吸综合征（SARS）病毒全基因组芯片，覆盖了SARS病毒基因组的全部序列，旨在检测SARS病毒的同时全面监测该病毒全基因组变化，这种病毒全基因组时代。蛋白芯片[10]，特别是免疫芯片（immunochip）等分子诊断学新技术的快速发展，又为肿瘤学（检测多种肿瘤标志物）、内分泌学（检测数种不同激素）、自身免疫诊断（检测各种过敏原）、血液学（输血筛选）及环境微生物监测等提供了新方法和新思路。2000年，Joos等[11]应用免疫微数组实现了18种自身抗原的诊断；2001年，Huang等[12]实现了基于抗体微数组的24种细胞因子的检测，这些新方法和新技术的广泛应用，不仅为临床医学提供更丰富、更有效的数据和信息、而且有利于临床医生对疾病进行全面分析，为实现“疾病以治疗为主转向以预防为产”奠定了基础。　　三、尽快制订分子诊断的标准化和监管体系，已迫在眉睫　　分子诊断技术虽然具有特异性好、灵敏度高、针对性强、诊断快速等优点，但其存在操作复杂和难经进行临床检验诊断，需要解决的关键是方法的标准化。《The Journal of Molecular Diagnostics》杂志曾在2001年基因技术用于疾病的诊断。FDA将着重检查评估家系遗传分子诊断的方法和实验室资历质等；实验方法的原理、步骤、应用范围报告方式，以及与临床诊断一致性等因素进行证，并在全美建立一个完善的遗传学检验的质量控制体系，规定报告模式和回馈给被检者的信息范围。专家认为，实施这一计划的目的即为了安全、有效、合法地进行分子诊断。我国各实验室建立了很多的分子诊断方法；有的已应用于临床，但往往存在方法不够成熟和稳定性的问题，也缺乏方法学的比较研究，导致检验结果难以为临床提供确切的信息，近年来有关部门已开始对感染疾病的病原微生物核酸的检测进行了管理，但尚未涉及致病基因检测领域，因此，建立分子诊断方法的金标准和标准操作等程序（standard operation procedure，SOP），并尽早制定出一个符合中国国情分子诊断监管体系已迫在眉睫。　　总之，分子诊断学将成为21世纪检验医学的主题。分子诊断技术将朝着高效、准确、灵敏和无创伤性的方向发展；21世纪是以生物技术为突出代表的生命科学和世纪，分子诊断的技术优势和巨大潜力，尤其是生物芯片的发展，将成为最有希望为改善世界各国，特别是广大发展中国家人们的健康状况做出贡献的生物技术之一。随着人类基因组计划的完成和蛋白质组计划的启动，分子诊断方法将极大的推动现代检验医学的发展，并在更深层次揭示疾病的本质，指导临床诊断和治疗。

应当说绝大部分的学校都有文科专业的。（清华，北大，人大，等都有的）