现代生物技术在带给人类新的社会、经济效应的同时,也可能带来潜在的负面影响。一方面,由于生物技术的对象是生命,使其因在人、动物、植物和微生物之间进行人为的相互转移,目前人类对这种基因调整后的结果尚无十足的把握’,因而其负面影响可能会超越以往任何一种技术,可能危及生命或环境;另4方面则与人类自身的问题有关,社会存在敌对势力和犯罪分子,很难确保他们对生物技术成果进行正确合理的操作和运用,进而危害人类和社会安全。 一、生物技术对农业的影响 生物技术在农业上的应用主要有:细胞i程育种、胚胎技术繁殖、生物农药及畜禽疫苗、转基因动植物等。 (一)生物技术对农业的影响。 · 基因表达调控是个复杂的生命现象。目前,由于科技发展水平的限制,人类对基因的活动方式了解还不够透彻,当一种转基因农作物研制成功时,虽能确保转入基因的安全性,但其对其他基因的影响及长期累积的后果却很难在当时弄清。因此,人们还没有十足的把握控制基因重组后的结果。学者们提出生物技术最有可能在以下几个方面给人类和环境造成二些不良后果: 1.转基因农作物的毒性问题。转基因农作物主要是使用细菌和病毒作载体,通过启动基因和标记基因实现新物种的培育。在基因转移中使用最多的是反转录病毒和病毒‘,它们可能诱发癌症和其他疾病。启动基因是转录脱氧核糟核酸的引发基因,它可以使基因连续不断地表达(多达10d旧次)。由于它具有很强的突破物种之间的屏障的能力,因此可能使抗病毒系统不起作用,并与其他病毒重新组合,产生传染性更强的病毒。 2.转基因生物带来的抗药:性和过敏性问题“研究表明,棉铃虫已对转基因抗虫棉产生抗性。转基因抗虫棉对第一、第二代棉铃虫有很好的毒杀作用,但第三代、第四代棉铃虫已对转基因棉产生抗性。专家警告,如果这种具有转基因抗性的害虫变成对转基因表达蛋白具有抗性的超级害虫,就需要喷洒更多的农药,将会对农田和自然生态环境造成更大的危害。 此外,转基因活生物体及其产品作为食品进入市场,可能对人体产生某些毒理作用和过敏反应。例如,美国S11ARMNK玉米嵌人了很强的BT毒素,这种玉米仅获准作为动物饲料。但2叨O年9月,发现这种玉米进入了人类的食物链,并产生过敏反应。最终,含有这种玉米的食物被大批处理掉,造成巨大损失。又如,转入的生长激素类基因可诱发对抗生家产生抑制力的病毒或细菌。人类食用转基因食品后,自身体内会产生对抗生素的抵抗力,降低抗生素类药物的效力。 3.转基因生物的环境生态问题。具有抗除草剂性能的转基因农作物可能会长期依赖化学制品,并可能使毗邻植物成为转基因作物,甚至使杂草对除草剂产生抗性而成为“超级杂草”,从而严重威胁其他作物的正常生长和生存。有实例证明,当油菜田里存在野芥菜或小麦田里存在联体羊草时·,便会发生上述情况,而且杂草一旦对除草剂产生抗性后,经过代代遗传,其新生代杂草将完全改变性质。美国纯种试验公司发现,他们培育的基因改良新草种,其花粉能飘到300米甚至900米以外。种植在距转基因西红柿地1.2公里外的传统西红柿,其后代约有35%—72%的概率含有转基因成分。·由此,造成严重的基因污染问题,破坏原有的自然生态平衡,导致物种灭绝和生物多样性的丧失。 (二)转基因农作物安全发展的情况。 人们对生物制品给人类造成的影响和危害只能进行某种程度的预期。我们应看到,转基因农作物的出现,首先是人类生产和生活质量提高的需要,它的负面影响只是发展中的问题。它对贫穷落后的发展中国家解决人口增长和食物不足的尖锐矛盾有重大意义。因此,不同的国家对转基因技术有不同的期待。有些国家可能关心利用其改善食品质量,有些国家也许关心提高农作物产量。现在,世界各国对转基因研究的态度分为两大阵营: 一是以美国为代表的群体,包括阿根廷、加拿大和澳大利亚等国,主要致力于加强转基因作物研究及其应用,也是世界上转基因作物应用最广泛及出口最多的国家;二是以欧盟、日本为代表的国家对转基因作物持审慎态度,同时这些国家也认识到转基因作物巨大的经济价值,因而并末因此放松研制开发。其实真正的利害冲突在于转基因作物引发的国际贸易战,后者拒绝的不是转基因作物本身,而是极力主张限制转基因作物的进口。 二、现代生物技术对医疗及社会的影响 现代生物技术在基因诊断治疗技术,如基因预测、基因预防、基因诊断、基因治疗、基因疫苗、定制药物,延缓衰老和“返老还童”技术、记忆药物、细胞及组织器官的修复及再生等医疗方面产生重大影响。而争论较多的是基因治疗、克隆人及胚胎干细胞问题。· , ,(一)基因治疗的风险。 基因治疗是指将外源基因导人受体细胞,并使之有效表达而达到治疗目的的技术。 1.目前基因治疗主要通过病毒载体格基因导人人体,表达出所需要的蛋白质,以控制人体特定细胞与器官的形成与运作。从技术过程来说,科学家还没有开发出有效的载体,保证能够把设计的基因在有效的基因表达时间段内传送到细胞中的预想位置,而且尚无法控制基因信息安装出错的情况。因此,目前对改变遗传基因技术的要求是,通过同源基因重组技术而不是添加外来基因的手段,以此来减少医原性危害并增强基因表达的正确性。 2.基因导人造成的遗传改变将决定个体遗传前途而且会跨代遗传。科学家认为,在涉及导人基因的人体实验时,必须强调其多代遗传稳定性b尚需经过印—80年,在获得具有多代遗传实验的数据后才能使用。 3.利用体细胞与胚细胞进行基因治疗,在添加外来基因时容易产生医原性基因损伤或某种基因紊乱。此外,在动物体内清除与某种疾病相关的基因的同时,也有可能清除了该基因给动物所带来的其他好处。 目前基因疗法尚处于研究阶段,曾有过基因治疗致死的先例,在以基因修饰的病毒作新基因的裁体取代原基因时,也出现因过敏致死的病例。 (二)克隆人及胚胎于细胞引发的问题。 于细胞是指存在于早期胚胎、脊髓、脐带、胎盘和部分成年人组织或器官中的尚未分化的细胞,它能够发育成多种人体组织和器官,这对于有效地用于受损组织与器官的替代、修复、移植或再生具有极好的前景,成为许多疑难病症的新型治疗方式。而利用胚胎于细胞克径胚胎,可以克隆出人。1四9年12月,美国《科学》杂志公布的当年世界科学进展的评定结果,干细胞研究名列十大科学进展首位,超过举世瞩目耗资巨大的人类基因组计划。 科学界又把对人体的克隆分为治疗性克隆和生殖性克隆。治疗性克隆主要是指利用克隆人的胚胎于细胞,通过动物培育出人体器官,供医学研究和临床治疗。这种用人自体的细胞进行器官克隆,既克服了异体器官移植会产生的排异反应,还解决了器官来源问题。目前,全世界有很多实验室在开展克隆人体器官的研究,正在实验室中培植的人体器官有心脏、肝脏、胰腺、乳房、皮肤、骨酪、角膜等。其中,由实验室培育的克隆胸骨、血管、皮肤和神经组织正在进入人体实验阶段。生殖性克隆指通过克隆而发育成长为完整的个人。就目前看,生殖性克隆和治疗性克隆都存在一定问题,引起了一系列伦理学和社会学问题。 这个是负面影响
“现代生物技术丛书”是化学工业出版社重点策划、隆重推出的一套精品图书,已被国家新闻出版总署列为“十五”国家重点图书。该套书由我国著名生物技术专家焦瑞身先生担任编委会主任,各相关领域科研、教学、产业一线具有权威性的专家学者共同撰写。《生物制药技术》是一本全面介绍生物制药技术的图书。本书以当代生物制药技术的研究和进展开篇,包括基因组技术、高通量药物筛选技术、手性合成、组合生物合成、生物芯片等高新技术;之后按照生物制药的方法分为微生物制药、新型发酵技术制药、生物转化、转基因制药、抗体工程制药、细胞培养、海洋生物制药等章进行药物生产的详细介绍;最后对分离纯化和分子育种两项生产关键技术进行了集中阐述。本书引用了大量的文献资料,集中反映了该领域国内外的技术现状和研究趋势,对于生物药制领域的科研技术人员是很好的技术资料和借鉴。其对各种制药方法的介绍,理论与实践相结合,是相关专业学生和相近专业技术人员学习和深入生物制药领域的好参考 第一章 当代生物制药技术的方法与进展第一节 药物筛选模型改进、高通量筛选与虚拟筛选第二节 从微生物、海洋中开拓药物的新来源第三节 组合生物合成与表面展示技术第四节 生物芯片技术第五节 微生物基因组第六节 生物手性合成技术参考文献第二章 微生物制药第一节 微生物药物第二节 核酸、核苷和核苷酸类药物第三节 药用氨基酸第四节 微生物产生的其他药用产品参考文献第三章 新型发酵技术制药第一节 微生物发酵技术制药的基础第二节 微生物发酵制药的技术第三节 微生物发酵罐与参数检测第四节 原位发酵和连续发酵第五节 微生物发酵制药新技术参考文献第四章 生物转化与药物合成第一节 微生物(酶)转化与手性合成第二节 甾体药物的生物转化第三节 生物转化与单一构型氨基酸的制备第四节 D型泛酸盐的生物转化第五节 不饱和脂肪酸的生物转化第六节 氧化葡萄糖酸菌与维生素C和a-葡萄糖苷酶抑制剂米格列醇的生的转化第七节 生物转化与R-(+)硫辛酸的制备第八节 其他一些重要品种的生物转化第九节 新生物转化系统的研究和应用参考文献第五章 转基因制药第一节 转基因动物制药第二节 植物医药基因工程参考文献第六章 抗体工程制药第一节 抗体分子和相关的免疫学问题第二节 多克隆抗体第三节 单克隆抗体第四节 基因工程抗体的研制第五节 抗体在生物医学中的应用第六节 工程抗体的中试和产业化参考文献第七章 细胞培养技术制药第一节 哺乳动物细胞培养第二节 植物组织细胞培养第三节 昆虫细胞培养参考文献第八章 海洋生物制药第一节 海洋微生物活性成分的研究及药物的开发第二节 海洋动植物活性成分的研究及药物的开发第三节 海洋毒素研究及其应用第四节 海洋药物研究现状及我国在这一研究领域中的对策参考文献第九章 生物制药的分离纯化技术第一节 细胞及组织的破碎第二节 沉淀第三节 溶剂萃取第四节 色谱分析参考文献第十章 制药工业微生物的分子育种技术第一节 传统突变筛选技术第二节 基因克隆第三节 组合生物合成第四节 定向进化第五节 展望参考文献中西文名词对照
药品生物测定的发展趋势〔摘要〕 生物测定是经典的药品检测专业之一,现代仪器分析的广泛应用,给其带来了极大的挑战和机遇,面对目前的基本状况,阐明了生物测定专业在中药开发、新药研制、药物安全性评价及微生物限度检查方面的应用和发展趋势。 〔关键词〕 生物测定;药理;药品 药品是特殊商品,药品质量直接关系到用药者的安全和疗效。药品检测方法和检测水平随着制药工业的发展不断改进提高。由于现代科学技术的发展,相邻学科之间的相互渗透,分析化学的发展经历了三次巨大的变革,使分析化学发展成为以仪器分析为主的现代分析化学。面对生命科学中复杂的分离分析任务,发展了色谱分析方法。结构分析、价态分析、晶体分析等方面的研究又促进了光谱分析的发展。以计算机应用为主要标志的信息时代的来临,仪器分析迅速发展,为药物检测提供各种非常灵敏、准确而快速的分析方法〔1〕。生物测定受到了极大的挑战,其发展前景令我们从事药品生物测定工作者所关注。 1 药品生物的特点与业务范围 1 药品生物测定的定义与特点 药品生物测定(简称生测)是利用药品(或药品中的有害杂质)对生物(或离体器官及组织)所引起的反应来测定药品的含量或安全性的一种方法。 生测法的优点是测定的结果与医疗要求基本一致,能直接反映药品的效果或毒副作用,这是其他物理学方法或化学方法所不能达到的。因此,目前各国药典仍大都采用这一方法。 生测法的缺点是检验周期长,微生物有生长繁殖过程,动物有生理代谢过程,观察分析时间一般在2~7天,有些试验会更长。影响因素多,有生物差异性,也有系统操作误差和环境条件等造成的影响。用品用具、动物质量、仪器设备都会对结果产生影响〔2〕。所以,以生测主检的品种在中国药典中逐版减少。 2 药品生物测定的业务范围 中国药典是法定的药品标准,它将药品质量控制项目归为四类:性状、鉴别、检查和含量。生测的业务主要涉及到中西药品的检查类和含量类。 其中作为药品安全性检查项目最多,包括:无菌、热原、细菌内毒素、异常毒性、安全试验、急性全身毒性、过敏物质、刺激性、溶血、降压物质、微生物限度等。含量(或效价)测定包括:抗生素微生物检定法,胰岛素、硫酸鱼精蛋白、缩宫素、卵泡刺激素、黄体生成素、升压素等生物检定法。 2 药品生物测定的现状 由于现代化检测仪器的广泛应用,药品生物测定的品种和范围,方法和要求,也发生了很大变化。 1 品种和范围的变化 抗生素的含量测定,最初大部分抗生素用微生物法测定含量。随着制药工业发展,提纯方法不断改进,有效组分更加明确,许多品种检测方法不断改为仪器测定和化学测定。例如:2000年版中国药典收载约219个抗生素品种,其中有15个原料药及其制剂从1995年版的化学法和微生物法改为高效液相色谱法(简称HPLC),使该法达到97种,微生物法仅有24个,其中9个品种是新增加的。有人预计本世纪初,HPLC法会发展成为中国药典使用频率最高的一种仪器分析法〔3〕。规定取消抗生素过期检验,抗生素微生物效价测定的业务工作量更是明显减少。 药品注射剂的热源检查。1942年美国首先将家兔法收入药典,相继世界各国药典均规定用该法。中国药典从1953年开始收载。自1973年以来,鲎试剂被证明是一种检测细菌内毒素(热原)存在的灵敏试剂。用鲎试剂要比家兔试验迅速、经济,所需样品量少,操作过程工作量小,每天可进行许多样品检测。1980年美国药典20版首载“细菌内毒素检查法”,1985年USP21版收载5种注射用水及40种放射性药品。1991年11月执行的USP22版第五增补版公布了185种药品删除家兔法,用细菌内毒素检查法代替。1995年USP23版注射剂的热源项几乎都被细菌内毒素检查法代替〔4〕。 我国从20世纪70年代开始研究制备鲎试剂,1988年卫生部颁布细菌内毒素检查法,1993年中国药典第二增补本收载该法,但未涉及任何品种,1995年中国药典二部正式收载,并规定了注射用水、氯化钠注射液和二十多种放射性药品并删除热源检查,以内毒素代替。2000年版中国药典进一步扩大到68种。预计2005年版中国药典还要继续增加品种,热源项都将被内毒素代替。动物试验改为生化试验。 2 实验动物 生测离不开实验动物,在实验中,为了减少生物差异,提高动物反应敏感性,以最少的动物达到最满意的结果。国家非常重视实验动物,1988年国务院颁布了《实验动物管理条件》,对实验动物的饲管、管理、使用等做出了明确规定,实行达标认证制度,严格管理。按微生物控制程度把实验动物分为四级:普通动物、清洁动物、无特殊病原体动物和无菌动物〔5〕。一般动物实验必须达到清洁动物标准,种系清楚,不杂乱,无规定指出的疾病。动物级别越高,饲养管理条件越严,设施投资越大。实验动物是实验研究的活试剂,既要有纯度,也要有数量,背景明确,来源清楚,符合要求才能使用。(随着药品纯度的提高,凡是有准确的化学和物理方法或细胞学方法能取代动物实验,进行药品和生物制品质量检测,应尽量采用,以减少动物的使用。) 3 药品生物测定在方法上的改进与变化 为了缩短操作时间,减少实验误差,近年来生测方面也研制并投入使用了部分仪器设备,如:抗生素抑菌圈测定仪、微机热原测温仪、集菌仪、细菌数测定仪等,减轻了工作强度,提高了工作效率,检测结果更加准确可靠。 3 药品生物测定的发展趋势 生测作为经典方法沿用至今,表明它有其他方法不能替代的特点,在药品检验中发挥了重要作用。不少老产品改为其他方法控制质量,也会不断有新产品离不开生测法,我们应当充分发挥它的优点,尽量克服它的不足,开拓新的业务范围。1 微生物限度检查工作量大 为了控制药品染菌限度,1975年美国药典19版首载微生物限度检查,1980年英国药典收载,我国在1990年由卫生部颁布了药品卫生标准及检验方法,1995年版中国药典正式收载〔6〕。2000年版中国药典按剂型规定了微生物限度标准,执行范围除注射剂和中药饮片外几乎包括中西药的所有制剂和原料。该项检查成为药典品种适用最多的检查项目,占当前地市级药品检验所生测室业务工作量的80%以上。在这项检查中,有大量的业务技术需要我们进一步研究,改进试验条件,使数据准确,探讨快速检测的新方法。药包材的检查,国家药监局已经发布试行标准,业务范围将更加扩大,这是我们进一步做好工作,努力探讨研究的新领域。 2 药品生物测定在中药开发中的作用 我国是中药王国,2000年版中国药典一部共收载920种,其中中成药398种。有含量测定的157种,仅占总数的17%,中药成分多,杂质和干扰物质很多。复方制剂,尤其大复方制剂专属性的检出处方中所含药材很困难,有大量的研究工作需要做。中成药中的杂质如重金属、残留农药等达到一定水平会产生毒副作用,影响药物安全性〔7〕。要让中药制剂打进国际市场,我们在检查类的控制项目和含量类的方法探讨方面有大量工作要做,生物测定可以在毒理、药理方面进行研究、探讨,逐步完善质量控制标准,提高制剂质量发挥更大的作用。 3 新药研制开发与安全性评价 新药研制开发是多学科合作的系统工程。在获得一个具有生物活性的化合物后,研究开发组织者要在生物医学领域进行药物评价研究,首先必须组织药理学、毒理学、病理学、兽医学、遗传学、生物化学、药代动力学方面的专家进行合作研究,按药物非临床研究管理规范GLP进行管理。组织药理、毒理(包括一般毒理和特殊毒理)、病理、药代动力学和毒代动力学、药物分析、临床化学、实验动物、生物统计、质量保证等部门有关人员进行讨论,分阶段做出评价〔8〕。生测在这方面可以参加开发研究或进行技术指导。 药物动力学研究,通常需要从动物体液或组织器官匀浆中分离、鉴定和检测代谢后的原粉及其他代谢产物。但是,将服药动物按指定时间间隔处死,测定随时间变化的血药浓度,不仅动物用量大,而且常因动物个体差异无法得到可靠结果,也无法在同一动物重复实验确证。处死动物的代谢产物也只能反映被处死时的结果,无法了解药物代谢的全过程。有学者报道,采用微透析取样技术,可在活的动物不同部位重复取样,用微柱液相色谱〔9〕或毛细管电泳〔10〕进行分析,测定药物的吸收、分布、代谢和排泄情况〔11〕。 自动进取样装置和计算机工作站应用于药理实验的探讨,使药品生物测定趋向微量、灵敏、专属、简便、快速和自动化的方向发展。 综上所述,药品生物测定是药物分析的重要组成部分,是不可缺的检测专业,现代仪器的大量使用,不仅不会影响其发展,而是如虎添翼,让药品生物测定展示出新的前景。 〔参考文献〕 1 倪坤义,田颂九,丁丽霞21世纪药物分析学的发展趋势中国药学杂志,2000,35(12): 2 张治锬抗生素药品检验北京:人民卫生出版社,1991,12- 3 田颂九,丁丽霞,田洁国内外药典中质量标准的发展趋势简述中国药学杂志,1999,34(11): 4 吴伟洪鲎与鲎试验法论文汇编(三)厦门鲎试剂厂,1996, 5 施新猷医学实验动物学西安:陕西科学技术出版社,1989, 6 马绪荣,苏德模药品微生物学检验手册北京:科学出版社,2000, 7 李真,龚培力,曾繁典药物杂质及其对安全性的影响中国临床药学杂志,2001,17(6): 8 刘昌孝美国新药研究开展与药物安全性评价研究概况中国药学杂志,1999,34(11): 9 Chen AQ,Lunte CEMicrodialysis sampling coupled on-line to fast microbore liquid J Chromatogr,1995,691(1-2): 10 Qanson LACapillary electrophoresis and microdialysis:current technology and J Chromatogr B,1997,697: 11 Yang H,Wang Q,Elmquist WF,et The desin and validation of a novel intravenous microdialysis probe:application to fluconazole pharmacokinetics in the freelymoving rat Pharm Res,1997,14
、我国每年的“禁毒宣传月”从6月3日开始,这是因为历史上的这一天一位著名的民族英雄开始领导人民销毁收缴的鸦片,取得了禁烟斗争的伟大胜利,这位民族英雄是
药品生物测定的发展趋势 〔摘要〕 生物测定是经典的药品检测专业之一,现代仪器分析的广泛应用,给其带来了极大的挑战和机遇,面对目前的基本状况,阐明了生物测定专业在中药开发、新药研制、药物安全性评价及微生物限度检查方面的应用和发展趋势。 〔关键词〕 生物测定;药理;药品药品是特殊商品,药品质量直接关系到用药者的安全和疗效药品检测方法和检测水平随着制药工业的发展不断改进提高。由于现代科学技术的发展,相邻学科之间的相互渗透,分析化学的发展经历了三次巨大的变革,使分析化学发展成为以仪器分析为主的现代分析化学。面对生命科学中复杂的分离分析任务,发展了色谱分析方法。结构分析、价态分析、晶体分析等方面的研究又促进了光谱分析的发展。以计算机应用为主要标志的信息时代的来临,仪器分析迅速发展,为药物检测提供各种非常灵敏、准确而快速的分析方法〔1〕。生物测定受到了极大的挑战,其发展前景令我们从事药品生物测定工作者所关注。 1 药品生物的特点与业务范围 1 药品生物测定的定义与特点 药品生物测定(简称生测)是利用药品(或药品中的有害杂质)对生物(或离体器官及组织)所引起的反应来测定药品的含量或安全性的一种方法。 生测法的优点是测定的结果与医疗要求基本一致,能直接反映药品的效果或毒副作用,这是其他物理学方法或化学方法所不能达到的。因此,目前各国药典仍大都采用这一方法。生测法的缺点是检验周期长,微生物有生长繁殖过程,动物有生理代谢过程,观察分析时间一般在2~7天,有些试验会更长。影响因素多,有生物差异性,也有系统操作误差和环境条件等造成的影响。用品用具、动物质量、仪器设备都会对结果产生影响〔2〕。所以,以生测主检的品种在中国药典中逐版减少。 2 药品生物测定的业务范围 中国药典是法定的药品标准,它将药品质量控制项目归为四类:性状、鉴别、检查和含量。生测的业务主要涉及到中西药品的检查类和含量类其中作为药品安全性检查项目最多,包括:无菌、热原、细菌内毒素、异常毒性、安全试验、急性全身毒性、过敏物质、刺激性、溶血、降压物质、微生物限度等。含量(或效价)测定包括:抗生素微生物检定法,胰岛素、硫酸鱼精蛋白、缩宫素、卵泡刺激素、黄体生成素、升压素等生物检定法。 2 药品生物测定的现状由于现代化检测仪器的广泛应用,药品生物测定的品种和范围,方法和要求,也发生了很大变化。 1 品种和范围的变化 抗生素的含量测定,最初大部分抗生素用微生物法测定含量。随着制药工业发展,提纯方法不断改进,有效组分更加明确,许多品种检测方法不断改为仪器测定和化学测定。例如:2000年版中国药典收载约219个抗生素品种,其中有15个原料药及其制剂从1995年版的化学法和微生物法改为高效液相色谱法(简称HPLC),使该法达到97种,微生物法仅有24个,其中9个品种是新增加的。有人预计本世纪初,HPLC法会发展成为中国药典使用频率最高的一种仪器分析法〔3〕。规定取消抗生素过期检验,抗生素微生物效价测定的业务工作量更是明显减少药品注射剂的热源检查。1942年美国首先将家兔法收入药典,相继世界各国药典均规定用该法。中国药典从1953年开始收载。自1973年以来,鲎试剂被证明是一种检测细菌内毒素(热原)存在的灵敏试剂。用鲎试剂要比家兔试验迅速、经济,所需样品量少,操作过程工作量小,每天可进行许多样品检测。1980年美国药典20版首载“细菌内毒素检查法”,1985年USP21版收载5种注射用水及40种放射性药品。1991年11月执行的USP22版第五增补版公布了185种药品删除家兔法,用细菌内毒素检查法代替。1995年USP23版注射剂的热源项几乎都被细菌内毒素检查法代替〔4〕。 我国从20世纪70年代开始研究制备鲎试剂,1988年卫生部颁布细菌内毒素检查法,1993年中国药典第二增补本收载该法,但未涉及任何品种,1995年中国药典二部正式收载,并规定了注射用水、氯化钠注射液和二十多种放射性药品并删除热源检查,以内毒素代替。2000年版中国药典进一步扩大到68种。预计2005年版中国药典还要继续增加品种,热源项都将被内毒素代替。动物试验改为生化试验。 2 实验动物 生测离不开实验动物,在实验中,为了减少生物差异,提高动物反应敏感性,以最少的动物达到最满意的结果。国家非常重视实验动物,1988年国务院颁布了《实验动物管理条件》,对实验动物的饲管、管理、使用等做出了明确规定,实行达标认证制度,严格管理。按微生物控制程度把实验动物分为四级:普通动物、清洁动物、无特殊病原体动物和无菌动物〔5〕。一般动物实验必须达到清洁动物标准,种系清楚,不杂乱,无规定指出的疾病。动物级别越高,饲养管理条件越严,设施投资越大。实验动物是实验研究的活试剂,既要有纯度,也要有数量,背景明确,来源清楚,符合要求才能使用。(随着药品纯度的提高,凡是有准确的化学和物理方法或细胞学方法能取代动物实验,进行药品和生物制品质量检测,应尽量采用,以减少动物的使用。) 3 药品生物测定在方法上的改进与变化 为了缩短操作时间,减少实验误差,近年来生测方面也研制并投入使用了部分仪器设备,如:抗生素抑菌圈测定仪、微机热原测温仪、集菌仪、细菌数测定仪等,减轻了工作强度,提高了工作效率,检测结果更加准确可靠。 3 药品生物测定的发展趋势生测作为经典方法沿用至今,表明它有其他方法不能替代的特点,在药品检验中发挥了重要作用。不少老产品改为其他方法控制质量,也会不断有新产品离不开生测法,我们应当充分发挥它的优点,尽量克服它的不足,开拓新的业务范围。 1 微生物限度检查工作量大 为了控制药品染菌限度,1975年美国药典19版首载微生物限度检查,1980年英国药典收载,我国在1990年由卫生部颁布了药品卫生标准及检验方法,1995年版中国药典正式收载〔6〕。2000年版中国药典按剂型规定了微生物限度标准,执行范围除注射剂和中药饮片外几乎包括中西药的所有制剂和原料。该项检查成为药典品种适用最多的检查项目,占当前地市级药品检验所生测室业务工作量的80%以上。在这项检查中,有大量的业务技术需要我们进一步研究,改进试验条件,使数据准确,探讨快速检测的新方法。药包材的检查,国家药监局已经发布试行标准,业务范围将更加扩大,这是我们进一步做好工作,努力探讨研究的新领域。 2 药品生物测定在中药开发中的作用 我国是中药王国,2000年版中国药典一部共收载920种,其中中成药398种。有含量测定的157种,仅占总数的17%,中药成分多,杂质和干扰物质很多。复方制剂,尤其大复方制剂专属性的检出处方中所含药材很困难,有大量的研究工作需要做。中成药中的杂质如重金属、残留农药等达到一定水平会产生毒副作用,影响药物安全性〔7〕。要让中药制剂打进国际市场,我们在检查类的控制项目和含量类的方法探讨方面有大量工作要做,生物测定可以在毒理、药理方面进行研究、探讨,逐步完善质量控制标准,提高制剂质量发挥更大的作用。 3 新药研制开发与安全性评价 新药研制开发是多学科合作的系统工程。在获得一个具有生物活性的化合物后,研究开发组织者要在生物医学领域进行药物评价研究,首先必须组织药理学、毒理学、病理学、兽医学、遗传学、生物化学、药代动力学方面的专家进行合作研究,按药物非临床研究管理规范GLP进行管理。组织药理、毒理(包括一般毒理和特殊毒理)、病理、药代动力学和毒代动力学、药物分析、临床化学、实验动物、生物统计、质量保证等部门有关人员进行讨论,分阶段做出评价〔8〕。生测在这方面可以参加开发研究或进行技术指导。 药物动力学研究,通常需要从动物体液或组织器官匀浆中分离、鉴定和检测代谢后的原粉及其他代谢产物。但是,将服药动物按指定时间间隔处死,测定随时间变化的血药浓度,不仅动物用量大,而且常因动物个体差异无法得到可靠结果,也无法在同一动物重复实验确证。处死动物的代谢产物也只能反映被处死时的结果,无法了解药物代谢的全过程。有学者报道,采用微透析取样技术,可在活的动物不同部位重复取样,用微柱液相色谱〔9〕或毛细管电泳〔10〕进行分析,测定药物的吸收、分布、代谢和排泄情况〔11〕。 自动进取样装置和计算机工作站应用于药理实验的探讨,使药品生物测定趋向微量、灵敏、专属、简便、快速和自动化的方向发展。 综上所述,药品生物测定是药物分析的重要组成部分,是不可缺的检测专业,现代仪器的大量使用,不仅不会影响其发展,而是如虎添翼,让药品生物测定展示出新的前景。