酶在生物技术方面的应用论文题目

改良碱性磷酸酶染色法[日期：2008-08-11] 来源： 作者：乔海兵，邢开宇 【关键词】 碱性磷酸酶染色法 1939年Gomori首次提出碱性磷酸酶组织化学染色法用于哺乳动物神经系统血管内皮，1951年Gomori修改了自已的 方法 ，并称为“钙钴法”。1984年Bell在Gomori碱性磷酸酶染色法的基础上进行了改良，用于人脑海马和距状裂区的毛细血管取得成功〔1〕。本文以Bell法为基础，对其法的某些步骤进行了简化和改良， 应用 于脑微血管的 研究 ，同时可以显示出脑微动脉、微静脉。现将此法介绍如下。 1 原理 此方法为金属阳离子沉淀法。以β甘油磷酸钠为底物，在酶的作用下，产生磷酸离子与钙离子形成磷酸钙为第一反应产物。经硝酸铅处理变为磷酸铅沉淀，为第二反应产物。两种反应产物均易解离，进一步用稀硫化铵处理，形成稳定的硫化铅颗粒，沉淀于微血管内皮中，光镜下呈黑色〔2〕。 2 方法 1 取材 标本在24 h内取出,切成2 cm×2 cm×2 cm的组织块，放入4 ℃冰箱中保存。尽快放入固定液中固定24 h以上。 新鲜固定液的配制：无水氯化钙 5 g；巴比妥纳 5 g；纯甲醛液 5 ml；蒸馏水 488 ml。 2 脱水 组织固定好之后，移入70％的酒精24 h，依次移入85％酒精4 h，无水酒精，丙酮(1∶1)溶液4 h，无水酒精,乙醚(1∶1)溶液中4 h。 3 包埋 将脱水之后的组织块修整，移入5％的火棉胶溶液中浸泡包埋，放入4 ℃冰箱中，1周后可成块。 4 切片 切片厚度在60 μm左右，置入75％酒精中。 5 孵化 将切片放入孵化液中，在37 ℃恒温箱内孵化2 h～4 h。孵化液的配制：β甘油磷酸钠2 g;无水氯化钙96 g;巴比妥钠1 g;蒸馏水200 ml。 6 染色 将孵化好的切片快速更换3次蒸馏水，马上置入5％硝酸铅溶液中5 min，快速更换3次蒸馏水，然后放入2％硫化铵溶液中3 min，再快速更换3次蒸馏水。 7 裱片、脱水、封片 裱片后脱水，二甲苯透明封片。 3 改良措施 取材要新鲜，以免降低血管内皮碱性磷酸酶的活性。固定液和孵化液配好之后，可不调其pH值，只需用pH试纸测试固定液呈弱酸性，孵化液呈弱酸性即可。包埋过程中 应用 梯度包埋法，火棉胶浓度最高不能超过10％。先将组织块放入5％的火棉胶溶液中，留一小开口，置入4 ℃冰箱中，以利于酒精挥发，每天给容器加满火棉胶。2 d～3 d后改换10％的火棉胶，直至包埋好为止。包埋好的组织块应硬度适宜，用手指轻按可留有指纹，但不易碎。孵化过程适当延长，以利于内皮细胞碱性磷酸酶与孵化液充分反应。在裱片过程中由于切片较厚，切片很容易脱落。可采用先透明后封片的办法，既不 影响 切片的透明度，片子也不容易脱落。 4 讨论 碱性磷酸酶染色属于组化呈色法，由于此法对微血管显色均匀、充分，并可较好的反映正常微血管的 自然 扩张状态，有效地避免了血管灌注法的种种缺憾，而且此法经多次改良，使操作 方法 更为简单，呈色时间缩短，因而成为 目前 较为流行的一种微血管形态学的 研究 方法〔3〕。但Hunzlker等认为，由于小静脉内皮细胞碱性磷酸酶分布不集中，活性较低，因而微静脉难以显示。我们在研究过程中对碱性磷酸酶法进一步改良之后，可显示大量的带有三角形膨大的血管(见图1)，而这一特点正是微静脉所特有的，所以我们认为，并非微静脉用此法不能显示，而是在实验过程中pH值、温度掌握不准所致。 参考 文献 ： 〔1〕王有伟，陈以慈碱性磷酸酶染色法(钙铅法)在研究人脑和心脏微血管方面的应用〔J〕解剖学杂志，9(3)： 〔2〕杜卓民．实用组织学技术〔M〕北京：人民卫生版社，1982： 〔3〕张为龙脑血管研究近况〔J〕临床解剖学杂志，1986，4：

对日益严峻的全球化环境污染问题,环境工程技术与生物技术的结合发展,为环境保护污染治理提供了新的技术手段传统的污染治理方法存在着诸多的自身缺陷主要表现在：处理效率低下、占地广、浪费土地资源和能源、处理成本高、效果不尽理想、容易产生新废弃副产物,甚至产生新的污染源所以以环境生物技术为新技术体系解决环保污染的保护环境成为当今乃至未来发展的方向酶与酶技术的开发　与应用是环境生物技术中重要的部分 现代研究表明,酶与酶技术与环境保护的关系十分密切表现在三个方面第一,在产品加工过程中用酶来替代化学品（为生物过程代替化学过程反应温和）可以降低生产活动中的污染水平,有利于实现工艺过程生态化或无废生产,真正实现清洁　　生产的目标；第二,酶作为生物催化剂,只对产品内容起作用,使产品在过程中产生的污染大大减少,利于环境的保护；第三,酶的反应条件温和,专一性强,催化效率高等自身的特点,决定了对污染物处理和环境监测具有高效、快速、可靠的优点因此,酶工程技术在环境治理领域具有广阔的前景 酶与酶技术以实际应用的要求为目的,利用酶的催化特性对对象进行有用物质的生产或有害废物的分解几年来,环保用酶制剂与酶技术已经开始引起学术界的关注与国外在这方面的研究相比,国内环保用酶的研究工作刚刚起步,在实现工业化、商品化应用方面基本处于空白其原因主要还在于国内对环保用酶的研究系统方法落后,学科之间单兵作战,科研机构与生产厂商及应用单位相脱节,严重制约了环保用酶与酶技术的开发与应用,一直未能形成工业化和商品化的开发 环保用酶与酶技术的开发与应用项目,通过应用系统方法,对高效酶类的选用与开发、酶固定化（载体）材料的选择,酶生物反应器的研究与制造,以成本低、速度快、效率高、安全简便的操作解决环境污染中的废水处理问题开发出新一代的环保用酶制剂和酶生物反应器系列产品,并且使该技术得到产业化本项目的开发,对解决生活污水、工业废水、垃圾渗滤液的无害化处理带来崭新的突破,对环保领域酶制剂开发应用具有积极的意义 一、 国内技术发展的概况及需求 1、酶的发展现状酶作为生物催化剂是生物技术产业化的重要一环,它广泛应用于轻工、化工、医药卫生、食品、环保等行业,酶制剂生产已成为21世纪的新兴产业之一我国从20世纪60年代开始注意酶工程研究和酶制剂的开发,近年来,国际酶制剂行业发展迅速,这与广泛采用基因工程、蛋白质工程及其他新技术有关国内酶制剂工业的现状是投入少、缺乏核心技术,产品结构不合理、品种单一,重复建设现象严重,酶制剂应用领域仅局限于淀粉加工、洗涤剂工业等,影响了酶制剂行业的发展及应用领域的开拓全行业整体工艺技术与装备水平落后,绝大多数工厂沿用硫酸铵（硫酸钠）盐析工艺或发酵液直接喷雾干燥工艺,不仅产品质量差,也影响了下游产业产品质量的提高环保用酶受此影响,处理成本高使用推广慢因此,加快产品结构调整,努力提高产品质量,已成为酶制剂行业发展的当务之急 2、环保用酶应用及现状酶与酶技术用于环保领域,国内目前已经引起研究部门的重视,陆续有了这方面的相关报道,但在实践应用方面的开发仍属鲜见,几乎还处于空白 3、环保用酶的市场需求在社会生活不断现代代、工业化高速发展的今天,环境污染问题已日益严峻,传统的解决环境污染技术和工艺已经满足不了现实的要求,环保领域酶和酶技术的应用发挥越来越重要的作用,同时由于其广阔的市场前景,必将产生具大的经济效益和社会效益 二、 主要研究、开发内容及目标环保用酶与酶技术是国内研究之前沿领域,是一项系统的研究工程本项目技术开发、主要运用目前国内成熟的酶发酵工艺和提炼工艺生物下游技术生产低成本、高活性环保用酶和酶固定化载体材料的选取以及酶反应器的生产开发 本项目开发的重点在于酶与酶技术应用于废水处理的产品开发,将多种适用与废水处理的酶富集于反应器中处理污水从几个方面着力研究： 1、 环保用酶制剂工业化生产技术开发； 2、 环保用酶固定化廉价载体的应用； 3、 废水处理酶反应器的技术开发； 4、 以新型酶反应器为核心构件污水处理系统技术开发 酶与酶技术在环保产业中的开发应用项目,主要建立在目前科研单位研究成果的应用及我方科技人员原有的固体发酵生产纤维素酶其他酶的研究成果基础上,采用国内最新,成熟的技术装备,膜分离—超滤装备,“分子切割”技术装备,沸腾一次造粒技术制备高活性酶,以及应用吸附法,交联法等技术开发生产固定化酶,实现酶与酶技术在环保产业中的推广应用,开发出新型高效废水处理的环保用酶和酶生物反应器

酶在药物中的作用这题目有点大啊，很容易就写成综述了。建议缩小范围，专攻一点。

又称酵素。电话细胞产生的具有催化功能的蛋白质。目前已发现2000多种。分子量在数万至数十万之间。生物体内的含量一般极少，能参与生物体的各种生理生化活动，起催化剂的作用。酶不同于一般的催化剂，它有特殊的催化能力，在常温和常压下其催化效率比一般催化剂高10的7次方~10的13次方倍，如一个过氧化氢酶分子在一分钟内能使500万个过氧化氢分子分解为水和氢，比铁离子的催化效率高10的9次方倍。酶还有严格的专一性，一种酶一般只能专一地催化某一种或某一类化学反应。其缺点是不稳定，易受外界条件（如酸、碱和热等因素）的影响而变性失活。 工业上主要利用微生物发酵法生产各种酶制剂，其中应用最多的是淀粉酶制剂和蛋白酶制剂。淀粉酶主要用于纺织业进行棉布退浆，食品工业上使淀粉水解生成葡萄糖。蛋白酶大量用于皮革脱毛、蚕丝脱胶等。酶可作药物用于治病，如多酶片和胃蛋白酶是常用的助消化药。尿激酶可溶解血栓，是心肌梗死的急救药物。胰蛋白酶、糜蛋白酶等用于外科清创、化脓、腹腔浆膜粘连等的治疗。天门冬酰胺酶可使某种类型的白血病缓解。在分析和化验中使用酶，发展了许多快速、灵敏、专一的新方法，如在电极外包一层含葡萄糖氧化酶的薄膜，制成酶电极，用于测定血糖浓度，1分钟就可测1个样品，使化验速度显著加快。在饲料中添加一定量纤维素酶可使饲料中的纤维素水解生成葡萄糖，提高饲料的营养价值。